BMSCs移植对兔颈上交感神经节损伤保护作用的研究

来源 :南华大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:waxq134
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的将体外培养得到的兔骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cellsBMSCs)诱导分化为神经元样细胞,再植入兔颈上交感神经节(Superior cervicalsympathetic ganglion SCSG)损伤模型体内,观察瞳孔的变化,并检测局部组织NGF、VEGF的表达情况,探讨干细胞修复神经损伤的可能机制。方法选取4月大的新西兰兔,取股骨中的骨髓,经体外培养获得BMSCs,并诱导分化为神经元样细胞。利用小号持针器钳压榨兔颈上交感神经节,制备兔颈上交感神经节损伤模型。将健康成年的24只雄性新西兰兔,完全随机的分为四组,A组正常对照组,正常兔,不给于任何处理;B组模型对照组,颈上交感神经节损伤后不给予其他干预;C组培养液干预组,颈上交感神经节损伤后给予细胞培养液干预(不含细胞);D组为BMSCs移植组,颈上交感神经节损伤后给予神经元样细胞移植干预。模型制作成功7天时,C组用微量注射泵经耳缘静脉注入培养液1ml,D组用微量注射泵经耳缘静脉注入浓度为1×109/L的神经元样细胞培养液1ml,分别于移植后1d、3d、7d、14d、21d记录瞳孔的变化,移植21d后,处死兔,取颈上交感神经节,进行HE染色并检测神经生长因子(Nerve growth factor NGF)和血管内皮生长因子(Vascular endothedlial growthfactor VEGF)的表达。结果1、成功的培养了兔BMSCs,利用光学显微镜观察,原代兔BMSCs贴壁较少,大多数呈圆形或者类圆形,小部分呈短梭形,经过纯化、扩增后,贴壁细胞逐渐增多,表现为集落式生长,呈长梭形,局部呈漩涡状;随着传代次数的增加,传至6~7代,细胞生长逐渐缓慢,细胞开始呈扁平状;免疫细胞化学染色检测培养的BMSCs表面特异性标志物:CD34(一),CD54(+)。诱导分化后细胞鉴定多数细胞神经元特异性蛋白和巢蛋白呈阳性表达。2、瞳孔直径比较,在1d、3d、7d、14d、21d时,正常对照组的瞳孔直径(mm)分别为:7.21±0.77、7.72±0.99、7.33±0.35、7.45±0.56、7.41±0.65,模型对照组的瞳孔直径(mm)分别为:5.25±0.30、5.00±0.66、5.27±0.45、5.39±0.24、5.30±0.49,培养液对照组的瞳孔直径(mm)分别为:5.07±0.41、5.32±0.36、5.16±0.43、5.14±0.49、5.41±0.84,BMSCs移植组的瞳孔直径(mm)分别为:5.35±0.34、5.52±0.25、5.40±0.61、6.38±0.60、6.87±0.40。颈上交感神经节损伤后模型对照组、培养液对照组、BMSCs移植组瞳孔和正常对照组比较明显缩小,正常对照组瞳孔几乎无变化,模型对照组、培养液对照组随着时间的推移,瞳孔有所恢复,但变化不明显,BMSCs移植组瞳孔逐渐恢复,在14d时明显变大,21d时恢复更加明显,与正常对照组的差别逐渐变小。同时间点,不同组比较:模型对照组、培养液对照组、BMSCs移植组在1d、3d、7d、14d时间点,瞳孔直径均明显小于正常对照组(P<0.05);21d时间点,模型对照组、培养液对照组明显小于正常对照组、BMSCs移植组(P<0.05),BMSCs移植组与正常对照组比较无明显差异(t=-0.469,P=0.184);同组不同时间点比较:正常对照组、模型对照组、培养液对照组不同时间点比较无明显差异(F=0.483,P=0.748;F=0.618,P=0.0.654;F=0.407,P=0.802)。BMSCs移植组不同时间点比较,差异明显(F=13.150,P=0.000),14d、21d瞳孔直径明显高于1d、3d、7d(P<0.05),14d与21d比较,瞳孔直径差异不明显(t=-0.486,P=0.080)。3、神经节HE染色显示:光镜下正常对照组:神经细胞较多,细胞形态正常,大小一致,均匀分布,间质中几乎没有血管走形;模型对照组:神经元稀疏,细胞大小不一致,分布不均匀,多数细胞胞浆明显减少、细胞核固缩,细胞间质增生明显,间质中见少量血管增生;培养液对照组:细胞形态、间质及血管增生情况和模型自然恢复对照组大致相当。BMSCs移植组:细胞形态大致,大小及分布较一致,少量细胞细胞核固缩,间质增生不明显,但间质中可见大量血管走形。4、NGF免疫组化染色(单位:个):NGF阳性细胞数分别为:正常对照组:47.22+13.48,模型对照组:51.10+9.93,培养液对照组:56.63+7.96,BMSCs移植组:101.49+11.79。NGF阳性细胞数表达呈上升趋势,组间比较有差异(F=31.615,P=0.000),BMSCs移植组明显高于正常对照组、模型对照组、培养液对照(t=54.267,P=0.000;t=50.382,P=0.000;t=44.859,P=0.000);正常对照组、模型对照组、培养液对照组两两比较差异不明显(P>0.05)。5、VEGF免疫组化染色(单位:个):VEGF阳性细胞数分别为:正常对照组:13.46+2.68,模型对照组:17.62+7.22,培养液对照:18.91+7.26,BMSCs移植组:35.61+3.24。VEGF阳性细胞数表达呈上升趋势,组间比较有差异(F=18.634,P=0.000),BMSCs移植组明显高于正常对照组、模型对照组、培养液对照组(t=22.147,P=0.000;t=17.987,P=0.000;t=16.693,P=0.000);正常对照组、模型对照组、培养液对照组两两比较差异不明显(P>0.05)。结论1:兔骨髓间充质干细胞对兔颈上交感神经节损伤有修复作用。2:兔骨髓间充质干细胞修复神经损伤的机制之一可能是通过分泌NGF,VEGF等神经营养因子实现的。
其他文献
目的:研究不同卵巢激素水平对应激和非应激状态下大鼠结肠组织5-羟色胺受体3(5-HT3 receptors,5-HT3R)的影响,探讨肠易激综合征的发病机制。方法:将48只成年雌性SD大鼠,先随机分为3
目的;研究氯胺酮基础麻醉下小儿硬膜外曲马多用于术后镇痛的量效关系及其安全性.方法:择期行睾丸下降术、高位疝囊结扎术100例1-14岁患儿,随机分成五组.Ⅰ-Ⅳ组行硬膜外麻醉,
本研究旨在通过检测妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)患者母血清、脐血、胎盘瘦素的水平及其与胎儿体重指数的相关性,探讨瘦素与妊娠期肝内胆
随着语文教育改革的深入,如何去评价一节语文课的优劣应该引起我们深深的思考,在此就语文教学评价做点滴剖析,希望能达到抛砖引玉的目的。 With the deepening of the refor
苏霍姆林斯基说“没有一条富有诗意的感情和审美的清泉,就不可能有学生全面的能力发展”语文正是那股清泉.语文书中大多数的文章都包含着浓厚的感情色彩.感动人心者,莫过于感
山水画里的南北宗论是明清时期绘画理论中的重要思想之一,虽然学术界上自古到今都有许多赞成和反对的意见,但是,我们不可以忽视它对中国山水画发展的影响,甚至在当代艺术中还
白描艺术是中国画之基本功底的根本体现.李公麟作为历史上第一个把该艺术形式作为独力创作的大师,是十分值得当今人学习的.笔者通过具体分析及代表作来阐述其艺术特色与历史
生活是教材,活动是生命。教学活动必须源于真实的生活,注重学生丰富的体验,充分调动一切参与者的积极性。 Life is a teaching material, activity is life. Teaching activ
它以描写那生活于昌明隆盛之邦的一干风流冤家不幸遭际为主线,其中贾宝玉和林黛玉的爱情悲剧又处于众星拱月的中心地位.每每读来,总是无法释然.我曾埋怨过处处是桎梏牢笼的封
表现了王羲之对老庄思想、儒家思想有选择的吸收.他否定庄子“一死生齐彭殇”之说.又崇尚道家虚静无为的审美理想;他受到儒家思想的影响,追求和谐生活,曾积极用世;他同时又受