对急性梗阻性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡机制的实验研究

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目的:观察急性梗阻性胰腺炎(acute obstructive pancreatitis,AOP)大鼠胰腺细胞凋亡的发生规律及其内分泌的变化以及大鼠在乌司他丁、善宁干预后,大鼠胰腺细胞凋亡的发生规律及其内分泌的变化。方法:1.采用胆胰管结扎方法建立AOP大鼠模型梗阻8小时8只,梗阻12小时4只,待8~12小时后松开活结,使梗阻胆管畅通,对照组10只麻醉后开腹,翻动胃和十二指肠后关腹。麻醉苏醒后自由饮水进食后观察72小时,取血检测胰岛素和胰高血糖素以及血清淀粉酶的水平;取胰腺组织,采用TUNEL法与Real-Time-PCR Bax检测胰腺细胞凋亡情况。2.乌司他丁、善宁联合用药对急性梗阻性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡干预的实验研究,将采用胆胰管结扎方法建立AOP大鼠模型分为①乌司他丁预处理组②善宁预处理组③乌司他丁+善宁联合预处理组④梗阻性胰腺炎对照组,建立大鼠模型24小时后,取血检测胰岛素和胰高血糖素以及血清淀粉酶的水平;取胰腺组织,采用TUNEL法与Real-Time-PCR Bax检测胰腺细胞凋亡情况。结果:1.采用胆胰管结扎方法建立AOP大鼠模型,AOP大鼠在8h、12h时点的血清淀粉酶为(1198±687) U/l与(1698±1103)U/l、胰岛素(8.1±5.8) ng/ml与(12.7±6.9) ng/ml和胰高血糖素水平(6.8±4.6) ng/ml与(7.3±2.9)ng/ml;显著高于假手术对照组的(404±222)U/l(5.6±2.7)ng/ml和(2.6±2.1)ng/ml (P<0.05),胰腺组织在外分泌部分腺泡细胞与内分泌部分胰岛细胞均发生凋亡,8h、12h的细胞凋亡率分别为(20.5±11.2)%与(15.5±8.9)%,显著高于假手术对照组的(4.2±1.6)%(P<0.05)。2.乌司他丁、善宁联合用药对急性梗阻性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡干预的实验研究,在乌司他丁、善宁干预后,大鼠乌司他丁预处理组、善宁预处理组、乌司他丁+善宁联合预处理组的各种检测指标分别为:血淀粉酶(681.8±98.2) U/l,(806.4±129.1) U/l,(613.5±201.6)U/l;胰岛素(6.8±1.1)ng/ml,(7.2±2.1)ng/ml,(6.6±1.2)ng/ml;胰高血糖素(4.8±1.3)U/l,(5.0±1.5)U/l,(4.6±1.6)U/l,均低于梗阻性胰腺炎对照组(血淀粉酶979.6±216.2U/l,胰岛素8.6±1.8ng/ml,胰高血糖素7.6±1.2U/l),而血淀粉酶,胰高血糖素的改变有显著的意义(P<0.05)。乌司他丁预处理组、善宁预处理组、乌司他丁+善宁联合预处理组Real-Time-PCR Bax(1.8±0.3)(2.1±0.6)(1.9±0.6)显著低于梗阻性胰腺炎对照组(3.4±0.8)(P<0.05);采用TUNEL法检测乌司他丁预处理组、善宁预处理组、乌司他丁+善宁联合预处理组胰腺组织在外分泌部分腺泡细胞与内分泌部分胰岛细胞的凋亡程度(±,±,±~-)显著低于梗阻性胰腺炎对照组(+~++)(P<0.05)。结论:1.急性梗阻性胰腺炎胰腺炎模型组8小时与、12小时时点的细胞凋亡率显著高于假手术对照组,各组大鼠血淀粉酶、胰岛素和胰高血糖素检测在8小时、12小时时点,分别显著高于假手术对照组。2.乌司他丁、善宁联合用药对急性梗阻性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡干预的实验研究善宁可降低胰高血糖素,而乌司他丁与善宁联合组可降低血清血淀粉酶与胰高血糖素。2.乌司他丁与善宁均可降低凋亡相关基因Caspase-3的表达水平,并缓解胰腺内分泌与外分泌的凋亡程度,以联合组的作用为明显。
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