内参基因是一种在所有组织和细胞中都表达的基因,被经常用于研究靶基因的功能。家蚕作为经济昆虫模式生物,在研究昆虫基因组学、基因调控分子机制和遗传发育中发挥着必不可少的作用。内参基因在家蚕的基因功能研究中具有重要的作用。针对家蚕特殊的生命周期,其信号传导、蛋白合成与代谢的变化快速显著,其各组织的分化特异性高,组织之间的功能差异较大,选择合适的内参基因不仅可用于分析家蚕中基因和蛋白表达水平,也可以用于鳞翅目其他昆虫基因和蛋白的功能研究。本课题以家蚕为研究对象,对其多个常用的内参基因(gapdh、actin、tubulin)进行克隆、原核表达和纯化,并制备其多克隆抗体,测定抗体的效价;进一步检测制备的内参基因抗体和商品化的内参基因抗体在家蚕及其他物种中的杂交效果。结果表明,在原核细胞中成功表达了GAPDH、TUBULIN、ACTIN蛋白,并对目的蛋白进行纯化,制备了多克隆抗体。酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和蛋白质免疫印迹(Western Blot)结果表明,三个抗体效价均达到8000以上,并且在家蚕以及其他昆虫中的杂交条带单一,特异性强,具有普适性。综上所述,本研究通过构建gapdh/pET-28a、actin/pET-28a、tubulin/pET-28a的原核表达载体,诱导目的蛋白表达,进一步纯化抗原,免疫纯种兔等一系列步骤,成功制备了家蚕GAPDH、ACTIN、TUBULIN内参多克隆抗体,并对所制备抗体进行了检测,为鳞翅目昆虫基因和蛋白的功能研究奠定了一定的基础,具有重要的科学意义和广阔的应用前景。