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目的本实验以肾近曲小管上皮细胞（Renal proximal tubular epithelial cells,HK-2）为研究对象,探讨HK-2细胞暴露于一水草酸钙（Calcium oxalate monohydrate,COM）后,整合素连接激酶（Integrin linked kinase,ILK）在HK-2细胞表达水平的变化以及与上皮间质转换（Epithelial?mesenchymal transition,EMT）的关系。方法将HK-2细胞分为正常对照组（Normal control group,NC）和COM处理组（200μg/m L COM）,分别培养6h、24h和48h时,细胞增殖毒性检测实验（Cell Counting Kit-8,CCK-8）检测HK-2细胞的存活率;倒置显微镜观察HK-2细胞形态学变化;实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time,q RT-PCR）检测基质金属蛋白酶2（Matrix metalloproteinase 2,MMP-2）、基质金属蛋白酶9（Matrix metalloproteinase 2,MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制剂1（Tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP-1）和ILK的m RNA表达;蛋白质免疫印迹（Western blot,WB）检测EMT相关蛋白:E-钙粘蛋白（E-cadherin）、α平滑肌肌动蛋白（αsmooth muscle actin,α-SMA）、波形蛋白（Vimentin）和细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）重塑相关蛋白:MMP-2、MMP-9、TIMP-1、Ⅰ型胶原α1（Recombinant collagen type 1 alpha 1,COL1A1）、纤维连接蛋白（Fibronectin,FN）以及ILK蛋白的表达变化。结果1.COM对HK-2细胞损伤作用倒置显微镜观察HK-2细胞暴露于200μg/m L COM 6h、24h和48h后细胞形态学变化。NC组中,HK-2细胞呈圆形或者卵圆形,大小均一,细胞间连接紧密,融合后呈鹅卵石样。COM组中,HK-2细胞暴露于COM 6h时细胞形态逐渐发生改变,细胞形态由圆形变为长梭形,大小不一,部分细胞表现为纤维细胞形态,细胞连接较松散。HK-2细胞暴露于COM 24h和48h时,细胞成长梭形,形成纤维细胞样外观,细胞之间的间隙增大。CCK-8结果显示,HK-2细胞的存活率随暴露时间的增加而显著降低,COM呈时间依赖性抑制HK-2细胞的增殖活性。上述结果表明,COM对HK-2细胞具有一定的损伤作用。2.COM诱导EMT相关蛋白表达HK-2细胞暴露于COM中6h、24h和48h,与NC组相比,WB结果显示,COM组中Vimentin和α-SMA蛋白在HK-2细胞暴露于COM 6h、24h和48h时表达水平均增加（P＜0.01）,E-cadherin蛋白表达水平在6h、24h和48h依次递减（P＜0.01）,提示COM诱导HK-2细胞发生EMT变化。3.COM诱导HK-2细胞ECM相关蛋白表达与NC组相比,WB结果显示,COM组中COL1A1和FN蛋白在HK-2细胞暴露于COM 6h、24h和48h时表达水平均增加（P＜0.01）,随着HK-2细胞暴露于COM中时间的延长,COL1A1和FN蛋白表达量呈时间依赖性递增。4.COM对HK-2细胞MMP-2、MMP-9和TIMP-1 m RNA和蛋白表达的影响与NC组相比,q RT-PCR结果显示,COM组中MMP-2和MMP-9 m RNA在HK-2细胞暴露于COM 6h时表达水平无明显差异（P＞0.05）,在24h和48h时表达水平均降低（P＜0.01）;TIMP-1 m RNA在6h时表达水平无显著差异（P＞0.05）,在24h和48h时表达水平均增加（P＜0.01）。WB结果显示,COM组中MMP-2和MMP-9蛋白在6h、24h和48h表达水平均降低（P＜0.01）,且随着暴露时间的增加表达水平逐渐递减;TIMP-1蛋白在6h、24h和48h表达水平均增加（P＜0.01）,且随着暴露时间的增加表达水平逐渐递增。q RT-PCR和WB实验结果均显示MMP-2和MMP-9的m RNA和蛋白的表达以时间依赖性递减,TIMP-1 m RNA和蛋白的表达以时间依赖性递增。5.COM对HK-2细胞ILK m RNA和蛋白表达的影响与NC组相比,q RT-PCR和WB结果显示,COM组中HK-2细胞在COM中暴露6h、24h和48h后ILK的m RNA和蛋白表达水平均增加（P＜0.01）,且以时间依赖性递增。结论COM诱导HK-2细胞发生EMT,随着HK-2细胞暴露于COM中时间的延长,HK-2细胞发生EMT的能力加强,且ILK表达水平的变化与EMT发生成正相关,表明ILK可能参与COM诱导HK-2细胞发生的EMT改变。