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本文根据大黄鱼全基因组数据库,研究了大黄鱼谷胱甘肽过氧化物酶1和4(LcGPx1a、LcGPx1b、LcGPx4a 和 LcGPx4b)的 cDNA 全长序列结构,及其在不同组织中的表达特征,并且进行了副溶血弧菌感染大黄鱼的实验,利用荧光定量PCR技术来分析它们在4个主要免疫组织(肝脏、脾脏、肾脏和头肾)中的表达调控特征。同时,利用原核蛋白表达技术获得了 LcGPx1a和LcGPx1b重组蛋白,并检测它们的酶活性。主要结果如下:首先,从大黄鱼全基因组数据库中获得LcGPx1a、LcGPx1b、LcGPx4a和LcGPx4b的核心序列,利用3’、5’RACE技术获得各自的cDNA全长序列,并进序列结构分析,结果显示LcGPx1a、LcGPx1b、LcGPx4a和LcGPx4b的cDNA序列全长分别为917bp、884bp、1149bp和1161bp,并且通过SECISearech网站,在它们的3’非编码区序列中均发现了硒代半胱氨酸插入元件(SECIS),其中仅有LcGPx1b的SECIS元件为II型,而其余成员均为I型SECIS元件。同时利用InterPro Scan 5和SingalP网站对它们的氨基酸序列进行分析,发现它们的氨基酸序列中包含了能够编码硒代半胱氨酸(Sec)的密码子UGA,和GPx家族特有的催化四联体结构:Sec,谷氨酰胺(Gln),色氨酸(Trp),和天冬酰胺(Asn),并且仅在LcGPx4b发现了一段由15个氨基酸所构成的N端信号肽序列,而其余成员并未含有信号肽序列。最后,采用Mrbayes v3.2.6软件来构建GPx系统进化树,发现鱼类GPx1和GPx4分支中包含了 GPx1a、GPx1b、GPx4a和GPx4b小分支,说明在鱼类中这两个GPx基因可能存在多个亚型的现象。上述实验结果揭示了它们的序列特征和氨基酸结构组成,这为后续的功能研究奠定了分子理论基础。利用荧光定量PCR技术分析LcGPx1a、LcGPx1b、LcGPx4a和LcGPx4b的组织特异性分布,结果显示它们在不同组织中都有表达,其中LcGPx1b在肾脏和头肾处的相对表达量较高,而LcGPx4a和LcGPx4b在肝脏处的相对表达量较高,仅LcGPx1a的相对表达量在所有组织中并无明显差异。同时,选择大黄鱼的4个主要免疫相关组织(肝脏、脾脏、肾脏和头肾),并分析LcGPx1a、LcGPx1b、LcGPx4a和LcGPx4b在抗菌免疫过程中的时空表达特征,结果显示它们在副溶血弧菌感染后的Oh-96h期间呈现出了不同的表达模式:LcGPx1a和LcGPx1b在肝脏处的表达量变化非常显著,LcGPx1a呈下调表达并在24h处有最低的相对表达量,而LcGPx1b呈上调表达并在24h处有最高的相对表达量;LcGPx4a和LcGPx4b则在脾脏处均为上调表达。通过上述实验结果可以发现LcGPx1a和LcGPx1b对副溶血弧菌感染有较强的应激表达,因此选择构建它们的原核重组蛋白并进行酶活力测定。通过单碱基突变技术将编码Sec的密码子UGA突变为编码半胱氨酸(Cys)的密码子UGC,然后构建出Cys突变型pET-tla、tlb表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行蛋白表达,通过镍柱纯化、透析和浓缩等步骤,以获得重组蛋白tla、tlb。最后使用总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒来检测它们的酶活力,结果显示tla的酶活力为414.09 ± 42.35 mU/mg,tlb的酶活力为71.43 ± 8.25 mU/mg,因此初步推测tla具有较强的抗氧化能力。本论文的研究结果揭示了这四个基因的序列特征以及在抗菌免疫过程中各自的表达调控特征,为今后进一步研究GPx在大黄鱼体内的功能分化研究奠定了一定的理论基础。