新疆阿魏抗消化性溃疡物质基础及生产工艺的研究

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目的:①优选出新疆阿魏水溶性抗溃疡有效成分的提取工艺及纯化工艺。②确定新疆阿魏抗消化性溃疡的物质基础。方法:①以新疆阿魏水溶性提取物的出膏率和阿魏酸含量的综合评分为评价指标,采用均匀设计优选出新疆阿魏水溶性抗消化性溃疡有效成分的提取工艺。②采用小鼠胃溃疡模型为抗溃疡活性跟踪方法,通过溶剂极性梯度提取的方法分离新疆阿魏水溶性抗溃疡的活性部位并对氯仿部位采用硅胶柱色谱、制备薄层色谱等分离手段分离主要化学成分,结合核磁共振波谱确定其化学结构。③采用RP-HPLC法,梯度洗脱,建立新疆阿魏水溶性成分的指纹图谱。④以新疆阿魏水溶性提取物的出膏率和阿魏酸含量的综合评分为评价指标,分别采用高速离心和ZTC澄清剂纯化工艺对阿魏药液进行纯化。以溃疡抑制率为指标对两种纯化方法进行药效学试验比较,优选出新疆阿魏水溶性抗消化性溃疡有效成分的纯化工艺,然后将药液纯化前后的指纹图谱进行比较,以验证优化的纯化工艺。结果:①新疆阿魏水溶性抗溃疡有效成分的优化提取条件为:加水量为药材量8倍,提取2次,每次提取2.5h。②分离所得的化合物为:famesiferol B、famesiferol C、7-OH香豆素、7-OH香豆素与7-(3,7,11-三甲基-2,6,-二烯-9, 11,-二醇十二碳氧基)-邻羟基桂皮酸内酯。③以阿魏酸和F-2为对照品,色谱条件为:流动相:甲醇(A)-水(B);梯度洗脱0~5min,90%B;5~15min,90~82%B;15~25min,82~72%B;25~40min,72~42%B;40~50min,42~32%B;50~60min,32~26%B;60~80min,26~20%B;322nm检测;柱温为40℃;流速为1.0ml/min;进样量为20μl。④高速离心纯化工艺条件为:药液浓度比1:3,离心时间35min,离心转速4000r/min。ZTC1+l-Ⅱ天然澄清剂纯化工艺条件为:药液浓度比为1:22, ZTC用量为22%,B组份加入温度为70℃,A组份加入温度为50℃,澄清时间为1h。药效试验结果表明提取液经过离心纯化后药效未出现显著降低,而经过ZTC纯化后药效有明显的降低。离心纯化的药液与水提液的指纹图谱比:色谱峰数目与保留时间一致,峰面积有所增加,故确定采用高速离心法对药液进行纯化。结论:优化的提取工艺稳定、合理、可行。氯仿部位采用硅胶柱色谱、硅胶制备薄层分离所得7个化合物,结合核磁共振波谱鉴定出4个化合物,分别为: farnesiferol C、farnesiferol B、7-羟基香豆素(这3个化合物与文献报道一致)、7-(3,7,11-三甲基-2,6,-二烯-9, 11,-二醇十二碳氧基)-邻羟基桂皮酸内酯,其中7-(3,7,11-三甲基-2,6,-二烯-9, 11,-二醇十二碳氧基)-邻羟基桂皮酸内酯为本药材中首次分离获得。药效试验结果表明提取液经过离心纯化后药效未出现显著降低,符合纯化要求;离心前后HPLC色谱图也基本一致,故确定采用高速离心法对药液进行纯化。HPLC指纹图谱方法的精密度、稳定性和重复性均符合指纹图谱研究的技术要求,为新疆阿魏品质评价和质量控制提供一定的科学依据。
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