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目的研究miRNA-155-3p所介导的自噬在人结肠癌细胞(SW480、HCT-15、HT-29、HCT-116)和对奥沙利铂耐药的结肠癌细胞(SW480/OXA、HCT-15/OXA、HT29/OXA、HCT116/OXA)中的差异表达,对miRNA差异表达显著的细胞系中进行增殖、迁移、侵袭生物学行为状况和自噬调控耐药机制的研究,为进一步探索有效的逆转肿瘤耐药的方法开拓新领域。方法1.常规培养人结肠癌细胞(SW480、HCT-15、HT-29、HCT-116)采用药物持续作用和大剂量药物间歇诱导相结合的方法,建立耐奥沙利铂(OXA)的人结肠癌细胞系(SW480/OXA、HCT-15/OXA、HT29/OXA、HCT116/OXA),CCK-8法检测细胞耐药指数。2.实时荧光定量PCR(RT-q PCR)法来检测亲代与OXA耐药结肠癌细胞中miRNA-155-3p的差异表达水平,筛选出的细胞系用于接下来的实验(表达差异最大的细胞系)。3.选取表达差异最大的细胞系SW480进行以下实验,利用RNA干扰技术将差异表达miRNA的反义核苷酸转染耐药细胞SW480/OXA(敲除),根据转染物质不同,将其分为干扰组、阴性对照组和空白对照组,干扰组细胞转染miRNA-155-3p抑制物重组质粒载体,阴性对照组细胞转染无意义序列质粒载体,空白对照组细胞加入等量的PBS溶液。4.对三组细胞分别采用RTq PCR法检测miRNA-155-3p转录水平,采用Western blot法检测自噬相关蛋白表达水平,采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果1成功建立了耐奥沙利铂结肠癌细胞系,用时3个月,根据RI指数测得耐药细胞系为中度耐药,将其分别命名为新的耐奥沙利铂的耐药细胞系SW480/OXA、HCT-15/OXA、HT29/OXA、HCT116/OXA。2 PCR定量的结果显示miRNA-155-3p在耐药细胞系中高表达;3 WB法检测耐药细胞系中自噬蛋白表达水平,与亲本株相较,耐药细胞系中自噬蛋白表达水平增加(p<0.05),差异有统计学意义;4miRNA-155-3p抑制表达后,三组细胞中比较,干扰组的细胞中miRNA-155-3p及自噬蛋白的表达水平均较低,统计学的差异均有意义(p<0.05)。5沉默mi R-155-3p后,与阴性对照组和空白对照组比较,干扰组细胞中迁移和侵袭的细胞数目较低,差异均有统计学意义(p<0.05)。结论1 miRNA-155-3p通过抑制自噬的激活,降低结肠癌细胞对奥沙利铂的耐药性。2沉默miRNA-155-3p可抑制结肠癌耐药细胞的迁移和侵袭能力。图9幅;表3个;参129篇。