【摘 要】
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目的:调查miR-200b/c或ZEB1/2在LPS致急性肺损伤早期肺纤维化的作用并探讨其机制。方法:1.应用LPS三次打击的方法构建小鼠急性肺损伤早期肺纤维化模型。肺组织切片行HE和Mass
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目的:调查miR-200b/c或ZEB1/2在LPS致急性肺损伤早期肺纤维化的作用并探讨其机制。方法:1.应用LPS三次打击的方法构建小鼠急性肺损伤早期肺纤维化模型。肺组织切片行HE和Masson染色;RT-PCR检测肺组织miR-200b/c、ZEB1/2 mRNA表达;Western-blot检测肺组织ZEB1/2、E-cadherin、Vimentin和α-SMA蛋白表达。2.经气管内滴注miR-200b和miR-200c过表达慢病毒颗粒或ZEB1 shRNA和ZEB2shRNA预处理,继之按照前述方法建立急性肺损伤早期肺纤维化模型。3.LPS(0.1mg/ml)、TGF-β(0.5ng/ml)或LPS+TGF-β刺激大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞24h,检测P38/MAPKs、TGF-β/Smad信号通路的激活。结果:LPS处理后胶原纤维沉积逐渐增多,肺纤维化逐渐加重;miR-200b/c表达降低而ZEB1/2 mRNA及蛋白表达增加;E-cadherin蛋白表达逐渐减少,Vimentin、α-SMA蛋白表达逐渐增多。过表达miR-200b/c使靶基因ZEB1/2mRNA及蛋白水平显著降低,而ZEB1/2 shRNA使miR-200b/c表达显著增加。过表达miR-200b/c或抑制ZEB1/2均显著减轻肺损伤及肺纤维化,减少Vimentin和α-SMA蛋白表达,同时增加E-cadherin表达。LPS或TGF-β处理均可增加大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞中ZEB1/2蛋白表达,并上调Vimentin、α-SMA蛋白表达,减少E-cadherin蛋白表达;同时亦使P38和Smad3磷酸化水平升高;LPS+TGF-β共刺激可产生相加或协同作用。结论:在LPS致急性肺损伤早期肺纤维化过程中miR-200b/c及ZEB1/2表达失衡,E-cadherin表达减少而Vimentin和α-SMA表达增多;过表达miR-200b/c或抑制ZEB1/2在肺纤维化过程中发挥保护作用。其作用机制主要是通过激活P38/MAPKs和TGF-β/Smad信号通路。
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