论文部分内容阅读
孤儿核受体 Nur77 参与 cAMP 联合 MPA(medroxyprogesterone acetate,醋酸甲羟孕酮)诱导的人子宫内膜间质细胞蜕膜化过程,但具体机制不清。以Nur77为诱饵蛋白,采用酵母双杂交技术从人子宫内膜cDNA文库中筛选发现蜕膜化关键分子FOXO1A可能为Nur77相互结合蛋白。免疫共沉淀实验证实Nur77与FOXO1 A相互结合,Nur77的功能结构域LBD(Ligand binding domain,配体结合结构域)和 DBD(DNA binding domain,DNA结合结构域)介导Nur77与FOXO1A相互结合,而FOXO1A功能结构域DBD介导FOXO1A与Nur77的相互结合。进一步内源性免疫共沉淀实验表明在8-Br-cAMP和MPA联合诱导的人子宫内膜间质细胞中,Nur77 LBD/DBD与FOXO1A发生生理性相互结合。荧光素酶报告基因实验表明HEK293细胞中高表达Nur77 LBD/DBD可抑制FOXO1A下游靶基因启动子区IRS(Insulin reponse sequence,胰岛素反应序列)的转录活性,同时腺病毒介导的Nur77 LBD/DBD过表达明显抑制FOXO1A介导的人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中PRL(Prolactin,泌乳素)与 IGFBP1(Insulin-like growth factor binding protein 1,胰岛素样生长因子结合蛋白1)启动子的转录激活作用。进一步实时定量PCR、ELIFA(Enzyme-linked fluorescence immunoassay,酶联免疫荧光分析)与 ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay,酶联免疫吸附试验)等发现,人子宫内膜间质细Ⅰ胞体外蜕膜化过程中过表达Nur77 LBD/DBD可抑制FOXO1 A介导的PRL与IGFBP1蛋白的表达与分泌。这些结果提示人子宫内膜间质细胞中Nur77与FOXO1 A生理性相互结合参与人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中PRL与IGFBP1的表达与分泌的调控。实时定量PCR、ELIFA和ELISA等实验进一步发现Nur77 LBD与DBD结构域可明显抑制8-Br-cAMP联合MPA诱导的子宫内膜间质细胞中PRL、IGFBP1的表达与分泌;细胞骨架蛋白F-actin免疫荧光实验提示主要定位在细胞质中的Nur77 LBD结构域与定位在细胞核中的Nur77 DBD结构域均可抑制人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中细胞骨架的重构。人工诱导小鼠蜕膜化模型在体研究发现宫角注射腺病毒过表达外源性Nur77 LBD/DBD可明显抑制小鼠子宫人工诱导的胚胎种植和子宫内膜蜕膜化。综上所述,我们发现并证实孤儿核受体Nur77通过其LBD和DBD结构域与FOXO1A相互结合,参与调控8-Br-cAMP和MPA联合诱导的人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中标志基因PRL与IGFBP1的表达与分泌。通过对Nur77不同功能结构域在人子宫内膜蜕膜化过程中调控机制的深入研究,有望为辅助生殖过程中因蜕膜化障碍导致的反复种植失败的患者提供诊疗依据。