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帕金森病(PD)是一种中枢神经系统的退行性疾病,其典型的病理改变为中脑黑质的多巴胺能神经元变性坏死,导致纹壮体内多巴胺含量减少,引起一系列的临床症状。长期以来,口服左旋多巴一直是治疗PD的主要疗法,但随着病程的进展,L-DOPA的疗效逐渐下降并且出现病人难以忍受的副作用,目前认为基因治疗是最有成功希望的方法之一。本工作根据基因治疗需要,在四环素调控系统的基础上,构建了两个能通过四环素诱导调控治疗基因表达的通用型重组腺相关病毒载体质粒,通过携带的标记基因观察其功能和TH基因在转染细胞内的表达及调控,并探讨了腺病毒(Ad)和单纯疱疹病毒(HSV)对重组腺相关病毒载体中四环素调控系统的影响。主要功能和实验结果如下: 1.构建了pSVtTA、pSVbitTA两个通用型四环素诱导调控基因表达的腺相关病毒载体质粒,把四环素反应启动子、转录激活子、多克隆酶切位点等元件装置在两个ITR之间,外侧还带有新霉素、氨卞青霉素抗性表达盒,是真核细胞表达质粒。 2.将绿色荧光蛋白分别克隆到pSVtTA、pSVbitTA载体上,转染BHK-21细胞系,观察到基因表达,其表达量受四环素的衍生物强力霉素调控,呈剂量依赖关系。 3.将携带绿色荧光蛋白的两个载体质粒包装成重组腺相关病毒,能够在感染的HEK293、BHK-21细胞中表达,其表达量受四环素的衍生物强力霉素调控,并观察了Ad和HSV对重组腺相关病毒载体中四环素调控系统的影响。 4.将TH基因克隆到pSVbitTA载体上,转染BHK-21细胞,免疫酶细胞化学方法观察到TH基因表达强度随强力霉素的浓度不同发生变化,可以用四环素类药物进行诱导调控其表达。