【摘 要】
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肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是由表观遗传和基因遗传改变引起的,并且涉及许多细胞信号通路交叉联系的一种复杂疾病,也是世界上许多地区癌症相关死亡的主要原因之一。因此,探索能够有效治疗肝癌的方法具有重要的社会意义。溶瘤痘苗病毒(Oncolytic vaccinia virus,VV)具有多种抗肿瘤疗效的优势,从而成为有希望的基因治疗的载体。IL-24基因能够通过多重机
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肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是由表观遗传和基因遗传改变引起的,并且涉及许多细胞信号通路交叉联系的一种复杂疾病,也是世界上许多地区癌症相关死亡的主要原因之一。因此,探索能够有效治疗肝癌的方法具有重要的社会意义。溶瘤痘苗病毒(Oncolytic vaccinia virus,VV)具有多种抗肿瘤疗效的优势,从而成为有希望的基因治疗的载体。IL-24基因能够通过多重机制诱导肿瘤细胞凋亡从而能够有效地抑制肿瘤细胞的增殖和转移。实验结果显示,携带IL-24基因的溶瘤痘苗病毒VV-IL-24能够有效的抑制肝癌细胞的增殖。为了增强携带IL-24基因的溶瘤痘苗病毒VV-IL-24的抗肝癌细胞生长的效果,因而选择一种能够与VV-IL-24具有协同作用的抗肿瘤药物木犀草素进行联合治疗肝癌细胞生长的研究。VV-IL-24溶瘤痘苗病毒由本实验室构建,通过同源重组的方法,即在溶瘤痘苗病毒的TK区插入IL-24基因表达框,然后在通过PCR鉴定无野生病毒污染和有目的基因IL-24后大量扩增纯化病毒;利用MTT实验,以VV-EGFP为对照病毒,检测VV-IL-24对各种肝癌细胞的生长影响,结果显示VV-IL-24比VV-EGFP更有效的抑制肝癌细胞增殖;以及MTT实验检测VV-IL-24联合木犀草素以及各个单独处理组对肝癌细胞的杀伤影响,结果显示VV-IL-24联合木犀草素比单独使用VV-IL-24或单独使用木犀草素对肝癌细胞更有杀伤力;Hoechst33342染色实验和流式检测VV-IL-24联合木犀草素以及各个单独处理组对肝癌细胞凋亡的影响,结果显示VVIL-24联合木犀草素比单独使用VV-IL-24或单独使用木犀草素诱导更多肝癌细胞的凋亡;Western Blot检测VV-IL-24联合木犀草素以及各个单独处理组引起肝癌细胞的相关凋亡蛋白和抗凋亡蛋白的变化,结果显示VV-IL-24联合木犀草素比单独使用VV-IL-24或单独使用木犀草素使肝癌细胞的相关凋亡蛋白表达增加及抗凋亡蛋白表达降低;动物模型进一步验证了联合组VV-IL-24和木犀草素在体内比各个单独处理组更能够有效抑制肝癌细胞的生长。总之,携带IL-24基因的溶瘤痘苗病毒VV-IL-24联合木犀草素能够比单独使用VV-IL-24和木犀草素更有效的抑制肝癌细胞在体内和体外的生长,并且研究发现木犀草素能促进溶瘤痘苗病毒携带的目的基因IL-24在感染的肝癌细胞中的表达以及联合治疗引起更多肝癌细胞相关凋亡蛋白的上调和抗凋亡蛋白的下调,从而为治疗肝癌的临床研究提供新的思路和方向。
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