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目的(1)检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在胃癌组织中的表达,研究OPN与淋巴管生成及胃癌淋巴结转移之间的关系。(2)研究OPN在胃癌细胞株中的表达及其与淋巴管生成相关的因子血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)和环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)之间的关系,进一步探索OPN在胃癌淋巴结转移中的分子机制。方法(1)采用免疫组织化学染色法(EnVision二步法),检测93例胃癌原发灶标本中OPN与VEGF-C蛋白的表达情况,并用淋巴管内皮细胞特异性标志物-淋巴管内皮细胞透明质酸盐受体(lymphatic vessel endothelial hyaluronanreceptor,LYVE-1)的抗体进行免疫组织化学染色观测肿瘤新生淋巴管形成情况。(2)采用RT-PCR和Western-blotting方法检测胃癌细胞株MKN28、SGC7901、BGC823中OPN基因及蛋白表达情况。选择细胞株MKN28采用小干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)转染技术阻断OPN基因的表达,RT-PCR检测干扰前后胃癌细胞中COX-2及VEGF-C基因变化情况;Western-blotting方法检测干扰前后OPN、COX-2蛋白变化情况;ELISA方法检测干扰组与对照组细胞培养上清液VEGF-C蛋白的变化情况。结果(1) 93例胃癌组织中OPN与VEGF-C的表达阳性率分别为64.5%(60/93)、69.9%(65/93);19例标本中(20.4%)可检测到LYVE-1阳性的肿瘤新生淋巴管。OPN表达与VEGF-C表达呈明显相关,并且二者均与浆膜浸润、淋巴结转移、TNM分期等临床病理指标间呈相关关系(p＜0.05)。二者与肿瘤新生淋巴管形成之间无显著相关(p＞0.05);OPN与VEGF-C的表达情况与患者预后没有显著差异(p＞0.05)。(2) Western-blotting及RT-PCR检测结果表明胃癌细胞株MKN28、SGC7901中OPN在蛋白及基因水平均有表达而在BGC823中未见表达;进行RNA干扰后MKN28胃癌细胞株的COX-2在蛋白和基因水平表达均有下调;VEGF-C在蛋白和基因水平表达也有下降。结论(1) OPN在胃癌组织中高表达,在部分胃癌细胞株也有表达;胃癌组织中OPN表达与VEGF-C表达相关,二者均与胃癌浆膜侵犯、TNM分期及淋巴结转移相关。(2)应用siRNA技术干扰OPN可下调COX-2、VEGF-C,提示OPN可能通过影响COX-2、VEGF-C的表达来影响肿瘤的淋巴管形成及淋巴结转移。