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目的在动物水平上研究白藜芦醇通过激活SIRT1改善高脂饮食诱导的小鼠胸主动脉内皮的脂质沉积、炎症和功能障碍;在细胞水平上探究SIRT1改善胆固醇诱导的内皮细胞毒性的分子机制。方法1动物实验部分60只6周齡清洁级的C57BL/6雄性小鼠适应性喂养2周后随机分为4组,标准饮食组(SCD)、标准饮食+白藜芦醇组(SCD+RES)、高脂饮食组(HFD)、高脂饮食+白藜芦醇组(HFD+RES)。SCD或HFD喂养的同时喂饲RES 400mg/kg/天,为期22周。监测体重,检测各组血清血脂指标TC、TG、HDL-C、n HDL-C、LDL-C、VLDL-C;内皮功能指标NO、ET-1;炎性因子IL-18、IL-1β。2组织实验部分小鼠胸主动脉组织脱水处理,进行HE染色,观察血管形态学变化;油红O染色,观察胸主动脉血管脂质沉积的情况;血管张力环实验观察小鼠模型胸主动脉内皮依赖性舒张功能;免疫组化检测SIRT1、MCP1、XBP1s、e NOS;Western blot检测小鼠胸主动脉SIRT1、IRE1α、p-IRE1α、p-e NOS、XBP1s、NF-k B、p-ACC、p-AMPK、CHOP、TXNIP、NLRP3、Caspase1蛋白质水平。3细胞实验部分(1)白藜芦醇、EX527的作用:MTT法确定胆固醇、白藜芦醇干预后的细胞存活率以确定实验药物剂量,HUVEC细胞分组及加药后,WB进一步检测HUVEC的SIRT1、p-e NOS、HMGCR、SREBP2的蛋白质水平;浓度梯度EX527干预后,SIRT1活性检测试剂盒检测各组SIRT1活性,同时结合Western blot检测SIRT1蛋白质水平以确定EX527的作用浓度。然后将细胞分组并添加EX527或胆固醇或白藜芦醇,采用免疫印迹法进一步检测SIRT1、p-IRE1α、XBP1s、TXNIP、NLRP3、Caspase1、IL-18、IL-1β、HMGCR、SREBP2、INSIG2。(2)SIRT1过表达和敲低实验:将人脐静脉内皮细胞接种于六孔板中,空载质粒、SIRT1过表达质粒和SIRT1敲低质粒分别转染HUVEC,G418培养2周筛选出稳定转染细胞株。细胞分3组(1)CON组、CHO组、CHO+RES组、EX527组、EX527+RES组;(2)WT组、NC组、NC+CHO组、SIRT1-OP组、SIRT1-OP+CHO组;(3)WT组、NC组、NC+CHO组、SIRT1-KD组、SIRT1-KD+RES组。Western blot检测SIRT1、p-IRE1α、p-e NOS、XBP1s、TXNIP、NLRP3、Caspase1、IL-18、IL-1β、HMGCR、SREBP2、INSIG2的蛋白质水平。(3)XBP1s免疫共沉淀检测:空载质粒和SIRT1过表达质粒干预HUVEC,筛选稳转细胞株;胆固醇干预内皮细胞,分为5组:WT组、NC组、NC+CHO组、SIRT1-OP组、SIRT1-OP+CHO组。提取细胞全蛋白,加入乙酰化抗体后4℃旋转摇床过夜,Protein A+G提取Acetylated-Lysine Antibody-蛋白质复合物。Western blot检测Ace-XBP1s。结果1动物实验部分:与SCD组相比,SCD+RES组小鼠体重较轻;血清TC、TG、VLDL-C、HDL-C、n-HDL明显降低,NO、IL-1β、IL-18无明显变化;HFD组小鼠体重明显增高;TC、LDL-C、HDL-C、n-HDL、ET-1、IL-1β和IL-18明显增高,NO显著降低;与HFD组比较,HFD+RES组的小鼠体重明显减轻;TC、LDL-C、IL-1β和IL-18显著降低,NO水平显著增加,TG、ET-1的水平没有明显差异。2组织实验部分:与SCD组相比,SCD+RES组小鼠HE、油红O染色、免疫组化、WB蛋白质表达无明显差异;HFD组小鼠胸主动脉血管壁增厚,内皮增厚,炎细胞浸润;脂质沉积明显;胸主动脉舒血管功能障碍;免疫组化结果SIRT1、e NOS表达降低,XBP1s、MCP1表达增高;WB结果显示SIRT1、p-ACC、p-AMPK蛋白水平降低,IRE1α、p-IRE1α、p-e NOS、XBP1s、NF-k B、CHOP、TXNIP、NLRP3、Caspase1蛋白水平增高;与HFD组比较,HFD+RES组小鼠炎症减轻;脂质沉积减少;胸主动脉内皮依赖性舒血管功能改善;免疫组化结果SIRT1表达增高,XBP1s、MCP1、e NOS表达降低;WB结果显示SIRT1、p-ACC、p-AMPK蛋白水平增高,p-IRE1α、p-e NOS、XBP1s、NF-k B、、CHOP、TXNIP、NLRP3、Caspase1蛋白水平降低。3细胞实验部分:(1)与CON组相比,CHO组和EX527组SIRT1蛋白水平降低,p-IRE1α、XBP1s、TXNIP、NLRP3、Caspase1、IL-18、IL-1β蛋白水平增高,CHO组HMGCR、SREBP2、INSIG2蛋白水平增高;与CHO组和EX527组相比,CHO+RES组和EX527+RES组SIRT1蛋白水平增高,p-IRE1α、XBP1s、TXNIP、NLRP3、Caspase1、IL-18、IL-1β蛋白水平降低,CHO+RES组HMGCR、SREBP2、INSIG2蛋白水平降低。(2)WT组和NC组各指标无明显差异;与NC组相比,SIRT1-OP组INSIG2、IL-18、pro-Caspase1蛋白水平明显降低,SIRT1、p-e NOS蛋白水平明显增高,p-IRE1α、XBP1s、TXNIP、NLRP3、Caspase1、IL-1β、HMGCR、SREBP2蛋白水平无明显变化;与NC+CHO组相比,SIRT1-OP+CHO组SIRT1、p-e NOS蛋白水平增高,p-IRE1α、XBP1s、TXNIP、NLRP3、Caspase1、IL-18、IL-1β、HMGCR、SREBP2、INSIG2蛋白水平降低。(3)WT组和NC组各指标无明显差异;与NC组相比,SIRT1-KD组SIRT1、p-e NOS蛋白水平明显降低,p-IRE1α、XBP1s、TXNIP、NLRP3、Caspase1、IL-18、IL-1β、HMGCR、SREBP2、INSIG2蛋白水平增高;与SIRT1-KD组相比,SIRT1-KD+RES组SIRT1、p-e NOS蛋白水平明显增高,p-IRE1α、XBP1s、TXNIP、NLRP3、Caspase1、IL-18、IL-1β、HMGCR、SREBP2、INSIG2蛋白水平明显降低。(4)免疫共沉淀结果显示:WT组和NC组Ace-XBP1s水平无明显差异;与NC组相比,CHO组Ace-XBP1s水平明显增加,SIRT1-OP组Ace-XBP1s水平显著降低;与CHO组相比,SIRT1-OP+CHO组Ace-XBP1s水平显著降低。结论1白藜芦醇改善高脂饮食所致的小鼠高胆固醇血症,脂质异位沉积,胸主动脉内皮功能紊乱,其机制可能与SIRT1的激活减少脂质沉积、炎症和内质网应激有关。2胆固醇可诱导HUVEC发生内质网应激,增加XBP1s和TXNIP的表达,进而激活炎性小体NLRP3;SIRT1通过去乙酰化XBP1s抑制内质网应激,下调TXNIP/NLRP3,减少炎性小体的活化和炎性因子的分泌。