Vasa基因在不同倍性鲫鲤中的研究

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Vasa基因是DEAD-box家族中的一员,它编码一种依赖ATP的RNA解旋酶,在生殖细胞增殖和分化过程中发挥着重要作用。由于vasa基因仅在许多生物的生殖系细胞中特异性表达,因此被广泛用作研究生殖细胞的分子标记物,在动物生殖细胞发生和生殖调控等研究中起到了重要的作用。世界上首次培育成功的两性可育异源四倍体鲫鲤群体在生物进化和鱼类遗传育种方面都有重要意义。用雄性异源四倍体鲫鲤与雌性二倍体红鲫交配形成了不育三倍体湘云鲫二号。异源四倍体鲫鲤、三倍体湘云鲫二号的形成为不同倍性鱼的生物学比较提供了重要的生物学平台,因此对三倍体湘云鲫二号和异源四倍体鲫鲤生殖和发育的研究具有重要意义。本研究采用同源克隆和cDNA末端快速扩增技术(RACE),从三倍体湘云鲫二号与异源四倍体鲫鲤精巢中克隆得到vasa基因的全长cDNA序列。异源四倍体鲫鲤vasa基因cDNA序列全长2733bp,编码690个氨基酸;三倍体湘云鲫二号cDNA序列全长2721bp,编码689个氨基酸。红鲫vasa基因全长cDNA序列已有报道。三者均具有DEAD-box家族成员特有的8个保守基序和vasa基因的典型特征。RT-PCR结果表明,vasa基因只在三倍体湘云鲫二号与异源四倍体鲫鲤的精巢和卵巢中特异表达,在其他组织部位不表达。实时荧光定量PCR (realtime PCR)结果表明:鲤鱼、红鲫、异源四倍体鲫鲤的卵巢和精巢中vasa基因的表达量在繁殖期低于非繁殖期;但在三倍体湘云鲫二号卵巢中vasa基因的表达量在繁殖期高于非繁殖期,在精巢中vasa基因的表达量繁殖期与非繁殖期无显著差异;在胚胎发育的各个时期,三倍体湘云鲫二号和异源四倍体鲫鲤vasa基因表达量均高于红鲫。原位杂交结果显示vasa基因在鲤鱼、红鲫、三倍体湘云鲫二号和异源四倍体鲫鲤精巢和卵巢中均有表达,在卵巢中三倍体湘云鲫二号的表达量与鲤鱼、红鲫和异源四倍体鲫鲤无显著差异;在精巢中三倍体湘云鲫二号vasa基因表达量明显低于鲤鱼、红鲫和异源四倍体鲫鲤。本研究具体阐述了vasa基因的表达与不同倍性鱼的可育(二倍体改良红鲫和异源四倍体鲫鲤)和不育(三倍体体湘云鲫二号)的关系。证实了vasa基因在多倍体鲫鲤性腺发育过程中起着至关重要的作用,为研究三倍体湘云鲫二号不育机制提供了实验依据并奠定了理论基础。
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