产乙醇重组菌的构建

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该研究的目的是筛选能有效利用木糖的肠道细菌,并从中选择合适的宿主,引入运动发酵单胞菌(Zymomonasmobilis)乙醇生物合成途径的关键酶编码基因pdc、adhB,构建底物利用范围宽广的产乙醇基因工程菌.从2730株自然分离的菌株中筛选得到了32株能在木糖为唯一碳源的培养基上快速生长的菌株.经初步鉴定,确定其中7株为大肠杆菌,25株为肺炎克雷伯氏菌.其中的大肠杆菌能够以乳糖、蔗糖、D-甘露醇、D-山梨醇、L-阿拉伯糖、L-鼠李糖、D-木糖、蜜二糖、甘露糖为唯一碳源生长,肺炎克雷伯氏菌能够以乳糖、蔗糖、D-甘露醇、D-山梨醇、L-阿拉伯糖、L-鼠李糖、D-木糖、蜜二糖、甘露糖、肌醇、纤维二糖为唯一碳源生长.在以不同浓度的葡萄糖或木糖为唯一碳源的无机盐培养基中生长时,Escherichia coli 947和Klebsiellapneumoniae 1569在培养6h后进入平衡生长期.E.coli947和k.pneumoniae1569在葡萄糖浓度为2.5﹪和5﹪时菌体浓度(OD<,550nm>)最高可达0.8~0.85,7.5﹪和10﹪葡萄糖时菌体浓度可分别达到0.7、0.6左右.木糖浓度为2.5﹪和5﹪时,菌体浓度可分别达0.6~0.75.同样条件下,E. coli JM109培养10~12h后进入平衡生长期,菌体浓度达0.21~0.55.
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