超抗原(Superantigens,SAgs)是一类特殊的抗原分子,能够引起T细胞非特异性激活,产生极强的免疫应答效应,引发如中毒性休克综合征、多器官衰竭和自身免疫性疾病等严重的临床症状。另一方面,超抗原又能刺激机体产生大量有生物活性的细胞因子,增强机体对肿瘤的杀伤活性。金黄色葡萄球菌肠毒素N(Staphylococcus entertoxin N,SEN)和金黄色葡萄球菌肠毒素Q(Staphylococcus entertoxin Q,SEQ)是近年分离出的新型超抗原,在众多食物性中毒事件中扮演着重要角色。目前为止,SEN和SEQ引发免疫效应的作用机制尚不明确。本研究通过基因扩增方法获得sen和seq基因,分别将sen和seq基因克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建得到重组表达质粒pGEX-6P-1-sen和pGEX-6P-1-seq,将重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,分别获得SEN和SEQ蛋白表达菌株。将SEN和SEQ蛋白在大肠杆菌中高效可溶表达,破碎菌体获得可溶蛋白,通过GST亲和层析、Mono Q离子交换层析、Superdex 200分子排阻层析等一系列层析方法获得高纯度SEN和SEQ蛋白。使用结晶试剂盒,采用坐滴结晶法对SEN和SEQ蛋白进行结晶条件筛选与优化,最终在2%(v/v)Tacsimate~TMM pH 4.0,0.1 M三水合乙酸钠pH 4.5,12%(w/v)聚乙二醇3350和6%(v/v)乙二醇,0.1 M柠檬酸pH 3.5,8%(w/v)聚乙二醇6000分别获得SEN和SEQ蛋白的高质量晶体,并通过SDS-PAGE和Western blot验证晶体为蛋白质晶体。获得的SEN和SEQ晶体进行X射线衍射,得到SEN(2.0?分辨率)和SEQ(3.0?分辨率)衍射数据。通过HKL-2000、iMosflm、CCP4、COOT、Phenix等软件处理衍射数据,解析获得了SEN和SEQ蛋白结构。本研究为SEN和SEQ的精细结构分析及SEN/SEQ-MHC-TCR三元复合物结构的解析奠定了基础,有助于从结构角度阐明SEN和SEQ的作用机制,从而为药物设计和疾病预防提供理论支持。