论文部分内容阅读
第一部分CEACAM6表达与胰腺癌患者临床病理参数及预后的相关性研究研究背景和目的：癌胚抗原相关细胞黏附分子6（carcinoembryonic antigen-related cell adhesionmolecule6, CEACAM6）作为癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）基因家族中一种具有癌基因功能的分子黏附蛋白，广泛高表达于多种恶性肿瘤，与肿瘤细胞增殖、侵袭和转移密切相关。本部分研究通过检测胰腺癌组织标本中CEACAM6及E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达情况，探讨CEACAM6表达与胰腺癌患者临床病理参数、预后之间的关系，以及CEACAM6表达与E-cadherin的相关性。方法：1.回顾性分析2008年7月至2010年12月于南京医科大学第一附属医院99例手术切除的胰腺导管腺癌患者的临床资料并对其进行随访。2.免疫组化染色方法检测胰腺癌标本中CEACAM6及E-cadherin表达情况。3. Kaplan-Meier曲线描述胰腺癌患者的生存期，并采用Log-rank检验对临床资料和数据进行统计分析。4. Cox regression风险回归模型对胰腺癌预后和各临床病理参数进行单因素和多因素分析。5. Pearson分析CEACAM6与上皮间质转化标志物E-cadherin之间的相关性。结果：1.99例胰腺癌患者的生存时间1.0-46.0个月不等，中位生存期为16.0个月。2. CEACAM6表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、肿瘤T分期及神经侵袭不具有相关性，而与肿瘤淋巴结转移和组织学分级显著相关。3. CEACAM6表达阳性的胰腺癌患者预后明显差于CEACAM6阴性患者，CEACAM6阳性表达和阴性表达的患者中位生存期分别为15.0个月和37.0个月（P<0.001）。4.单因素分析结果显示，胰腺癌术后的生存期与患者的性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位及术后是否化疗无关，而与肿瘤的淋巴结转移、神经侵袭、肿瘤T分期、组织学分级、CEACAM6表达情况相关；多因素分析结果显示，淋巴结转移、神经侵袭、组织学分级、CEACAM6表达是胰腺癌患者预后的独立风险因素。5. Pearson分析CEACAM6与EMT标志物E-cadherin之间呈负相关。结论：1.胰腺癌中CEACAM6表达与淋巴结转移和组织学分级密切相关。2.胰腺癌中CEACAM6表达与患者预后密切相关。3.胰腺癌的淋巴结转移、神经侵袭、组织学分级、CEACAM6表达是胰腺癌患者预后的独立风险因素。4.胰腺癌标本中CEACAM6表达与上皮间质转化的上皮标志物E-cadherin呈负相关。CEACAM6介导EMT促进胰腺癌细胞株侵袭和转移的相关研究研究背景和目的：我们在第一部分证实CEACAM6与胰腺癌患者的预后、淋巴结转移以及组织学分化程度显著相关，同时免疫组化结果显示CEACAM6与EMT上皮标志物E-cadherin呈负相关。最近研究表明CEACAM6可促进胰腺癌细胞的侵袭和转移，但尚无关于CEACAM6能否调节胰腺癌EMT过程的报道。我们通过检测CEACAM6表达变化对胰腺癌细胞株EMT表型标志物的改变及生物学行为的影响，初步探讨CEACAM6调节EMT可能的信号通路。同时进一步验证调节CEACAM6特异性靶miRNA。方法:1.定量PCR和westen blot检测六种胰腺癌细胞株CFPAC-1、Capan-1、BXPC-3、PANC-1、SW1990和MIAPaCa-2中CEACAM6的表达情况。2．构建CEACAM6过表达/RNA干扰的慢病毒载体，流式细胞仪筛选出CEACAM6过表达及干扰的稳定转染胰腺癌细胞株。3.定量PCR及western blot检测CEACAM6表达变化对EMT相关表型标志物及转录因子的影响。4. MTT法检测CEACAM6表达变化对胰腺癌细胞株增殖能力的影响。5. Transwell检测CEACAM6表达变化对胰腺癌细胞株迁移和侵袭能力的影响。6.裸鼠胰腺原位成瘤实验检测胰腺癌细胞株PANC-1过表达CEACAM6后转移能力的影响。7.在线软件预测CEACAM6特异性靶miRNA，体外合成其模拟物，转染CFPAC-1细胞进行功能验证。结果：1. CEACAM6mRNA及蛋白水平在六种胰腺癌细胞株中呈不同程度的表达，CFPAC-1，Capan-1和BXPC-3细胞株呈高表达，而PANC-1、SW1990和MIAPaCa-2细胞株呈低表达。2.定量PCR及western blot验证过表达及干扰CEACAM6稳转细胞株成功建立。3.过表达CEACAM6的胰腺癌细胞株倾向于间质细胞发展：波形蛋白表达明显上调，而E-钙黏蛋白表达下降，伴有EMT转录因子Zeb1/Zeb2的表达上调。干扰CEACAM6的细胞株倾向于上皮细胞发展：波形蛋白表达下降，而E-钙粘蛋白表达升高，同时伴有转录因子Zeb1/Zeb2的表达下调。4. CEACAM6的表达变化不能显著改变胰腺癌细胞株的增殖能力。5.过表达CEACAM6具有促进胰腺癌细胞迁移和侵袭能力，干扰其表达则具有相反的变化。6.裸鼠胰腺原位成瘤实验显示胰腺癌细胞株PANC-1过表达CEACAM6后具有促进肝转移能力。7.在线软件预测结果显示miR-29a/b/c可能是CEACAM6特异性靶miRNA。转染CFPAC-1细胞miR-29a/b/c模拟物后，CEACAM6在蛋白和mRNA水平均明显下调。结论：1. CEACAM6可能通过调节EMT转录因子Zeb1/Zeb2促进胰腺癌细胞株的上皮间质转化。2.体内外实验证实过表达CEACAM6促进胰腺癌细胞株的侵袭和转移，干扰其表达抑制肿瘤的侵袭和转移。3. CEACAM6是miR-29a/b/c的特异性靶基因之一。