近年来,免疫治疗引领肿瘤治疗的新浪潮。树突状细胞（DCs）作为最有效的抗原呈递细胞（APC）,在启动抗肿瘤免疫反应中发挥着核心作用。DCs引发的免疫反应由多个级联步骤主导,包括免疫原性细胞死亡（ICD）、DCs的募集和DCs交叉呈递抗原。启动肿瘤免疫治疗中DCs的免疫反应依赖于这些步骤的共同调节,因此,需要设计一种可以同时调节这些过程的纳米药物,以增强肿瘤的免疫反应。免疫机制涉及复杂的过程,一些免疫性能不确定的载体材料可能会导致免疫信号的改变。因此,无载体的药物组装体可能是用于免疫治疗和联合治疗的理想纳米平台。基于此背景,本课题设计了一种能够同时调节DCs三个步骤的无载体纳米药物CC-6td纳米粒（CC-6td NPs）。CC-6td NPs 由二氢卟吩 e6（Chlorine6,Ce6）、塞来昔布（Celecoxib）和6-硫代-2’-脱氧鸟苷（6-thio-dG）共组装而成。光敏剂Ce6能够精准作用于肿瘤部位,并触发钙网蛋白（CRT）外翻和肿瘤相关抗原（TAA）释放等诱导ICD。Celecoxib是一种环氧合酶-2（COX-2）抑制剂,能够下调COX-2和前列腺素E2（PGE2）,已知肿瘤中的PGE2会引起自然杀伤细胞（NK细胞）损伤并减少趋化因子CCL5的产生,从而抑制DCs的募集,所以Celecoxib能够通过降低PGE2水平来增加DCs在肿瘤组织的募集。端粒靶向药物6-thio-dG可以诱导肿瘤细胞中的脱氧核糖核酸（DNA）损伤,DCs感知DNA损伤并激活干扰素基因的刺激物（STING）/I型干扰素（IFN-I）通路以增强DCs的交叉呈递能力,进而激活肿瘤特异性CD8+T细胞。因此,同时调控这三个过程,可以放大肿瘤的免疫治疗效果,为增强DCs引发的免疫反应提供了一种新的治疗方法。本课题的研究内容如下所述:1、采用纳米沉淀法制备无载体纳米药物CC-6td NPs,并表征其理化性质。透射电子显微镜（TEM）结果显示CC-6td NPs为分散均匀的球形,动态光散射仪（DLS）测定CC-6td NPs水合粒径为158.2 nm,zeta电势为-23.5 mV;1,3-二苯基异苯并呋喃（DPBF）探针证明CC-6td NPs能够稳定产生单线态氧（1O2）;小于5%的溶血率显示CC-6td NPs血液相容性良好。2、选择MC38结肠癌细胞表征CC-6td NPs在细胞水平的抗肿瘤效果和免疫效应。流式数据和共聚焦拍照均证明CC-6td NPs具有优于原料药Ce6的摄取行为;活性氧（ROS）探针实验显示CC-6td NPs能够引起明显的光动力治疗效果;MTT结果显示CC-6td NPs具有良好的光毒性,且基本无暗毒性,表明CC-6td NPs生物相容性良好且在光照下具有抗肿瘤作用;WB和ELISA实验证实CC-6td NPs能够下调PGE2的水平和COX-2的含量。CRT外翻、高迁移率族蛋白B1（HMGB1）释放和三磷酸腺苷（ATP）含量测定结果证明CC-6td能够诱导MC38细胞的ICD;免疫荧光照片和ELISA实验证明CC-6td NPs可引起MC38细胞DNA损伤,激活STING/IFN-I通路,产生细胞因子干扰素-β（IFN-β）,促进DCs的交叉呈递能力;DCs的体外共刺激实验显示CC-6td NPs可有效增加成熟DCs（mDCs）的比例。3、构建荷MC38结肠癌的C57BL/6小鼠模型,研究CC-6td NPs的体内分布、体内抗肿瘤效果和免疫效应。小鼠体内分布实验证明CC-6td NPs能够有效蓄积在肿瘤部位。双侧肿瘤模型实验显示CC-6td NPs可以有效抑制双侧肿瘤生长,增加肿瘤组织和脾脏的CD4+和CD8+T淋巴细胞的浸润,并提高淋巴结中mDCs的比例;小鼠体内的趋化因子CCL5和细胞因子干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的浓度均有提升,证明CC-6td NPs能够放大抗肿瘤免疫效果。抗复发肿瘤模型表征效应型记忆T细胞的比例和CC-6td NPs治疗组小鼠的肿瘤生长曲线及存活率,进一步展现出CC-6td NPs的长期免疫反应。综上,本课题设计了无载体纳米药物CC-6td NPs,其针对DCs克服肿瘤过程中的多个步骤实现同时调控,能够有效抑制肿瘤生长和术后复发,为增强DCs功能的免疫反应提供了一种新的治疗方法。