目的:检测P16^INK4A在亲本细胞MDA-MB-231、HS-578T中及耐药细胞MDA-MB-231/EPI和HS-578T/EPI中的表达,干扰P16^INK4A表达,探讨相关机制,揭示P16^INK4A通过改变细胞周期的分布促进乳腺癌细胞对表柔比星的耐药。方法:以人乳腺癌MDA-MB-231和HS-578T为亲本细胞,以MDA-MB-231/EPI（0.5,1,2,4,6和8mg/L6种不同的表柔比星筛选浓度）和HS-578T/EPI（0.5,1和1.5mg/L3种不同的表柔比星筛选浓度）为耐药细胞;MTT法检测亲本细胞与耐药细胞的IC50值及RI值;Western-Blot法检测耐药相关蛋白、P16^INK4A以及其作用的相关蛋白的表达;流式细胞术检测亲本细胞和耐药细胞的细胞周期分布;慢病毒包装的P16^INK4A si RNA沉默P16^INK4A的表达。结果1.耐药性检测:两种耐药细胞MDA-MB-231/EPI和HS-578T/EPI对表柔比星、紫杉醇及5-氟尿嘧啶在24h、48h和72h的IC50值及RI值均比亲本细胞MDA-MB-231和HS-578T的高（p<0.01）,且在MDA-MB-231/EPI和HS-578T/EPI中,IC50值与RI值与耐药细胞的筛选浓度呈正相关（p<0.01）。在MDA-MB-231/EPI和HS-578T/EPI中,P-gp、MRP1和ABCG1三种常见的耐药蛋白的表达量均比两种亲本细胞的表达量高（p<0.001）。2.体外细胞功能学试验:生长曲线结果显示,MDA-MB-231/EPI和HS-578T/EPI的生长速率较MDA-MB-231和HS-578T细胞低（p<0.001）。细胞对数增殖期的倍增时间结果显示:MDA-MB-231/EPI和HS-578T/EPI细胞的对数增殖期的倍增时间比MDA-MB-231和HS-578T细胞对数增殖期的倍增时间长,且MDA-MB-231/EPI和HS-578T/EPI细胞的对数增殖期倍增时间与筛选浓度相关（p<0.05）。流式细胞结果显示,与MDA-MB-231和HS-578T细胞相比,MDA-MB-231/EPI和HS-578T/EPI细胞的细胞周期存在不同程度的G1期阻滞,且G1期细胞比例与筛选浓度相关（p<0.05）,S期细胞比例与筛选浓度相关（p<0.05）。Western-Blot结果显示,与MDA-MB-231和HS-578T细胞相比,在MDA-MB-231/EPI和HS-578T/EPI细胞中,P16^INK4A表达上调,CDK6和Cyclin D1的表达、Rb蛋白的磷酸化水平均降低,降低程度与MDA-MB-231/EPI和HS-578T/EPI的筛选浓度正相关（p<0.01）。3.在MDA-MB-231/EPI（筛选浓度8mg/L）和HS-578T/EPI（筛选浓度1.5mg/L）中沉默P16^INK4A表达。与沉默P16^INK4A之前相比,表柔比星在24h、48h和72h的IC50值降低（p<0.001）,P16^INK4A表达下降,CDK6和Cyclin D1的表达及Rb蛋白磷酸化水平均上调（p<0.001）,生长速度加快,对数增殖期的倍增时间缩短（p<0.01）,G1期细胞比例下降（p<0.001）,S期细胞比例上升（p<0.01）。结论P16^INK4A通过抑制CDK6、Cyclin D1和RB蛋白的磷酸化水平,阻滞细胞周期G1/S期转换,增加乳腺癌细胞的表柔比星耐受性。