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研究背景移植物动脉病是目前器官移植发生慢性失功的共同病理变化，也是影响移植物长期存活的一个最重要因素。其主要的病理特征是移植物动脉广泛新生内膜增生，从而致使移植物动脉在移植后的数月至数年间出现管腔狭窄，引起移植器官的缺血缺氧和实质纤维化，最终导致移植器官功能丧失。近年来的研究发现，新生内膜绝大部分由平滑肌样细胞构成。新生内膜平滑肌样细胞和传统意义上的血管中膜平滑肌细胞不同，其中最为重要就是新生内膜中的平滑肌样细胞高度表达中膜平滑肌细胞表面没有的CCR1。多种动物模型研究显示，骨髓间充质干细胞、中膜平滑肌细胞、血管外膜细胞及血管周围基质等都有可能存在新生内膜平滑肌样细胞的前体细胞。这些前体细胞通过不同粘附或者迁移途径，定居在新生内膜，分裂增殖，引起新生内膜过度增生，移植物动脉管腔狭窄。有研究表明，IFN-γ能够刺激诱导内皮细胞分泌多种趋化因子，其中RANTES很可能参与了炎症反应时，各种炎症细胞的渗出过程；还有研究表明RANTES可能参与了移植物动脉病的发生发展。但是平滑肌样细胞的前体细胞迁移至新生内膜的机制，目前尚不清楚。因此研究新生内膜平滑肌样细胞的募集机制可以为今后治疗和预防移植物动脉病提供新的靶点。目的检测内皮细胞分泌的趋化因子RANTES能否诱导中膜平滑肌细胞或新生内膜平滑肌样细胞的迁移。探讨内皮细胞参与移植物动脉病内膜平滑肌样细胞募集的机制。方法采用酶消化法和磁珠分选法原代培养小鼠心脏内皮细胞和主动脉中膜平滑肌细胞，采用持续扩增法纯化内皮细胞和平滑肌细胞；建立小鼠主动脉移植模型，采用酶消化法和持续细胞扩增法分离纯化新生内膜平滑肌样细胞；流式细胞技术鉴定新生内膜平滑肌样细胞；采用微流体实验装置模拟在体血管各层细胞生长；并与细胞划痕实验、Boyden chamber实验相比较，确定微流装置的实用性和有效性；采用IFN-γ刺激内皮细胞，Elisa方法检测并确定内皮细胞分泌的趋化因子；微流装置内培养内皮细胞、平滑肌细胞和平滑肌样细胞，检测IFN-γ刺激内皮细胞后诱导平滑肌细胞和/或平滑肌样细胞的迁移；采用siRNA方法抑制内皮细胞分泌趋化因子并用Elisa方法检测抑制效果；采用微流体装置检测siRNA抑制内皮细胞分泌趋化因子后，IFN-γ激活的内皮细胞诱导平滑肌样细胞的迁移。结果酶消化法和磁珠分选法能够有效分离培养出小鼠心脏内皮细胞和主动脉中膜平滑肌细胞。小鼠动脉移植模型是得到内膜平滑肌样细胞很好的方法，并能达到实验要求的纯度。微流体装置相比传统观察细胞迁移的划痕实验和Boyden chamber实验对细胞迁移的研究更直观、更敏感、更准确。siRNA方法能够明显抑制IFN-γ刺激活化的内皮细胞分泌趋化因子。IFN-γ刺激活化的内皮细胞分泌的细胞因子RANTES能够诱导平滑肌样细胞迁移，但不能诱导中膜平滑肌细胞的迁移。结论IFN-γ能够刺激活化内皮细胞分泌趋化因子RANTES。趋化因子RANTES能够诱导移植物动脉新生内膜平滑肌样细胞而不是正常动脉中膜平滑肌细胞的迁移，活化内皮细胞分泌的趋化因子RANTES可能在移植物动脉新生内膜平滑肌样细胞募集的过程中有重要作用。