鼻咽癌EBV-LMP1通过NF-κB信号通路调控WWOX表达的初步研究

来源 :广西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hubeibei1919
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目的:鼻咽癌是我国高发肿瘤之一,广东、广西、湖南、福建等省为高发区,起病隐匿,预后差。我们课题组前期研究首次发现,抑癌基因WWOX在鼻咽癌组织中表达降低,且随着癌症发生发展而逐步下降,并与淋巴结转移相关,提示抑癌基因WWOX与鼻咽癌的发生发展有关。EB病毒一种人类疱疹病毒,EB病毒致瘤蛋白LMP1可激活NF-κB信号通路,且WWOX又是该通路负向调控的靶点,故本研究以EBV的主要致瘤因子LMP1为切入点,初步探讨EBV主要致瘤基因LMP1是否通过NF-κB信号转导通路调控抑癌基因WWOX的表达。  方法:⑴LMP1分别与抑癌基因WWOX、NF-κB通路关系的研究应用Western blot、qPCR检测鼻咽癌细胞株CNE1和转染株CNE1-LMP1中NF-κB信号转导通路关键因子(IκBα,p100/p52,p-IκBα,p-p100/p52)以及WWOX的表达情况,探讨LMP1与NF-κB通路和WWOX的关系。⑵探讨LMP1是否通过NF-κB通路调控WWOX表达的研究用NF-κB信号通路抑制剂(MG132)处理CNE1-LMP1细胞株,Western blot检测处理前后NF-κB通路关键表达蛋白(IκBα,p100/p52,p-IκBα,p- p100/p52)和WWOX基因的蛋白表达,初步探讨LMP1是否通过NF-κB信号通路抑制WWOX的表达。  结果:①WWOX基因在CNE1-LMP1细胞中mRNA和蛋白表达情况的研究:qPCR和WB结果显示,WWOX基因mRNA和蛋白在CNE1-LMP1细胞中的表达水平均比CNE1细胞中的低,P值分别为0.047、0.003,差异有统计学意义,提示LMP1与WWOX表达相关。NF-κB信号通路关键蛋白在CNE1-LMP1细胞中表达情况的研究:在鼻咽癌细胞株CNE1与CNE1-LMP1的比较中,NF-κB通路中关键蛋白IκBα,p-IκBα,p100/p52,p-p100/p52表达的各P值分别为0.06、0.012、0.083、0.038,其中IκBα、p100/p52在CNE1与CNE1-LMP1中的蛋白差异表达不存在统计学意义,而p-IκBα,p-p100/p52在CNE1-LMP1中表达水平高于CNE1,差异具有统计学意义,提示NF-κB信号通路受LMP1调控。②使用通路靶向抑制剂(MG132)处理CNE1-LMP1细胞株后,WWOX蛋白的表达水平升高,P值分别为0.043,提示WWOX基因表达受NF-κB信号通路调控。另外,NF-κB信号通路的关键蛋白IκBα,p-IκBα,p100/p52,p-p100/p52在抑制剂处理前后的差异表达中,各P值分别为0.065、0.008、0.072、0.006,其中IκBα、p100/p52在药物处理前后的蛋白差异表达不存在统计学意义,而抑制剂处理CNE1-LMP1细胞以后,磷酸化蛋白p-IκBα,p-p100/p52的表达水平低于用药处理前,两者差异具有统计意义,说明抑制剂MG132有效抑制了NF-κB通路的激活。  结论:⑴与转染前的CNE1细胞株相比,转染细胞株CNE1-LMP1中WWOX基因表达水平降低,提示LMP1可抑制WWOX的表达。⑵在CNE1-LMP1细胞株中NF-κB信号通路磷酸化蛋白表达升高,说明LMP1能够介导调控NF-κB信号通路。⑶抑制NF-κB信号通路后,CNE1-LMP1细胞中WWOX基因表达较抑制前升高,提示LMP1可能通过NF-κB信号通路调控WWOX的表达。
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