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肺癌是中国最常见的恶性肿瘤之一,现今发病率、死亡率逐年升高,并呈年轻化趋向,严重威胁人类生命健康,已成为世界重大公共卫生问题之一。由于肺癌早期临床症状易被忽视,导致许多肺癌患者确诊时已至晚期,失去手术治疗机会,仅能保守治疗,并且即使早期确诊的肺癌患者,应用外科手术治疗完全切除原发病灶后,仍然有一定的肿瘤复发率。现如今,化疗作为肺癌的重要治疗方法,其对于根治术后患者也有一定价值。目前,铂类是非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)的化疗方案的基础,其联合如紫杉醇、吉西他滨等其他化疗药物仍是晚期NSCLC标准一线化疗方案。随着化疗在临床的广泛应用,化疗药物的耐药现象也突显,多药耐药是成功化疗的主要障碍,化疗耐药主要是由于化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡的能力降低,所以诱导肺癌细胞凋亡是其治疗的重要手段。全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)是一种维A酸类衍生产物,可调节细胞增殖、分化、凋亡等,其中对细胞的诱导分化作用最强,它应用于治疗急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)方面的临床效果显著,临床缓解率可达到85%以上;在其他实体肿瘤中的实验研究如在胃癌、乳腺癌、胰腺癌等方面的研究,也证实了ATRA应用于实体肿瘤治疗的潜力。研究发现肿瘤疾病的发生、进展以及其转归预后与细胞凋亡密切相关[24]。治疗性的细胞凋亡干预,是一种探索中的肿瘤疾病治疗手段,目前已成为全世界肿瘤治疗领域研究的一个热点。作为凋亡抑制基因家族的新成员survivin基因,于多种肿瘤组织、转化细胞中高表达,鉴于其在肿瘤组织中的表达特异性,以及它抑制细胞凋亡、影响细胞有丝分裂的作用,survivin基因于肿瘤方面的相关研究日渐深入。半胱氨酸天冬氨酸蛋白3(caspase-3)作为生物体发生细胞凋亡的关键因子,其于胞质中是以无活性的酶原形式存在,仅在细胞凋亡发生时被激活。近年来大量研究证实,ATRA可以诱导多种实体瘤细胞发生细胞凋亡,但其诱导凋亡的分子学机制还没有完全清楚。本实验研究中,我们运用ATRA药物作用于荷肺腺癌A549细胞移植瘤的裸鼠,采用RT-PCR方法检测裸鼠移植瘤组织中凋亡相关基因survivin和caspase-3信使核糖核酸(messenger RNA,m RNA)的表达情况,以探讨全反式维甲酸诱导肺腺癌A549细胞发生凋亡的可能机制。为肺癌发展新的治疗方法提供理论依据。目的:通过动物体内实验,探讨ATRA诱导荷瘤裸鼠肺腺癌A549细胞凋亡的可能机制。方法:1.首先培养人肺癌A549细胞,收集处于对数生长期的A549细胞,后将其接种于裸鼠背部皮下,构建裸鼠的肺腺癌A549细胞移植瘤动物模型。将荷瘤裸鼠动物模型随机分为模型组、ATRA组、顺铂组、ATRA+顺铂组4组,每组7只,隔日腹腔注射给药,共给药6次,计算各组荷瘤裸鼠移植瘤体积、体重。末次注射干预后次日脱颈处死裸鼠,取出裸鼠体内移植瘤瘤体。组织标本置于液氮中保存,每组取部分瘤体组织标本于10%甲醛溶液中固定,而后进行常规石蜡包埋及病理切片,以进行后续的实验检测。2.采用原位末端转移酶介导的缺口末端标记(Td T-Mediated d UTP-Biotin Nick End Labeling,TUNEL)染色法,检测4组裸鼠移植瘤组织中的细胞凋亡情况。3.采用逆转录-聚合酶链反应(Reverse Rranscriotion-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)法,检测各组裸鼠移植瘤组织中caspase-3和survivin信使核糖核酸m RNA的表达水平。结果:1.ATRA组、顺铂组及ATRA+顺铂组移植瘤体积、重量明显低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。ATRA+顺铂组移植瘤体积、重量明显低于ATRA及顺铂单药组,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.ATRA组、顺铂组及ATRA+顺铂组A549细胞裸鼠移植瘤细胞凋亡率较模型组显著增加,差异具有统计学意义(P<0.05);ATRA+顺铂组细胞凋亡率明显高于ATRA组与顺铂组,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.模型组移植瘤组织中caspase-3 m RNA的相对表达量为0.143±0.053,显著低于ATRA组、顺铂组及ATRA+顺铂联合用药组,差异具有统计学意义(P<0.05);ATRA组与顺铂组移植瘤组织中caspase-3 m RNA相对表达量均明显低于联合用药组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。模型组移植瘤组织中survivin m RNA的相对表达量为0.623±0.125,显著高于ATRA组、顺铂组及ATRA+顺铂联合用药组,差异具有统计学意义(P<0.05);ATRA组与顺铂组移植瘤组织中survivin m RNA相对表达量均明显高于联合用药组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论:1.ATRA与顺铂均能抑制人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的生长,促进移植瘤组织内细胞凋亡增加,且二者联合作用更强。2.ATRA可诱导荷瘤裸鼠肺腺癌A549细胞发生凋亡,其作用机制可能与上调caspase-3 m RNA的表达以及下调survivin m RNA的表达有关。