【摘 要】
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该次研究应用无症状溶组织内阿米巴包囊携带者的外周血淋巴细胞的totalRNA,以RT-PCR技术扩增免疫球蛋白轻链和重链基因,克隆入原核表达系统建立了人IgG抗体库,并筛选到了抗溶
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该次研究应用无症状溶组织内阿米巴包囊携带者的外周血淋巴细胞的totalRNA,以RT-PCR技术扩增免疫球蛋白轻链和重链基因,克隆入原核表达系统建立了人IgG抗体库,并筛选到了抗溶组织内阿米巴滋养体表面抗原的重组人单克隆抗体Fab段.进一步的体外功能性试验表明该片段可在一定程度上抑制阿米巴滋养体吸附和吞噬红细胞,因而在临床诊断和治疗方面具有潜在的应用价值.方法:提取无症状溶组织内阿米巴包囊携带者外周血中的淋巴细胞,分离总RNA,行RT-PCR扩增IgG轻链和重链Fd片段,并与原核表达质粒连接,转化大肠杆菌构建抗体库;应用抗原夹心膜法、IFA等方法筛选表达特异性抗溶组织内阿米巴滋养体的重组人单克隆抗体Fab段的克隆,并以活体IFA及激光扫描共聚焦显微镜确定其识别的抗原位置;纯化识别滋养体表面抗原的Fab片段,通过免疫印迹法检测Fab片段识别抗原的性质;对表达抗表面抗原的Fab段的DNA进行测序,推导其氨基酸序列并作结构和同源性分析;以不同浓度的抗体片段与溶组织内阿米巴滋养体孵育,观察其对滋养体吸附及吞噬人红细胞的影响.结论:1.应用无症状的溶组织内阿米巴包囊携带者的外周血淋巴细胞通过原核表达系统成功构建了一个人IgG抗体库.2.通过筛选获得了一个特异性抗溶组织内阿米巴的重组单克隆抗体Fab段,其识别的抗原为滋养体表面的半乳糖/乙酰氨基半乳糖凝集素(Gal/GalNAc lectin).3.一定浓度的该特异性片段在体外可抑制滋养体吸附和吞噬人红细胞.
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