低温限制植物的生长发育和地理分布,并且低温胁迫会给农林业生成造成较大的损失。ICE1作为CBF上游调控的转录因子,在低温胁迫应答中起着关键作用。前期研究结果,赤桉EcaICE1蛋白N端第126-185个氨基酸区域是其与EcaHOS1蛋白互作的关键区域,这有别于拟南芥。在赤桉此互作关键区内,尚不知是否存在影响泛素化的磷酸化位点及其对低温胁迫应答的影响。因此,本研究采用生物信息学预测方法,结合点突变技术,通过BiFC、酵母双杂、酵母低温胁迫等实验,鉴定影响EcaICE1与EcaHOS1蛋白互作的磷酸化位点,为研究EcaICE1如何通过泛素化途径调控赤桉低温胁迫应答的分子机制奠定基础。主要结果如下:（1）基于生物信息分析,位于EcaICE1与EcaHOS1蛋白互作关键区域的第143、145、158和184位氨基酸是EcaICE1潜在的磷酸化位点。通过酵母双杂分析表明,第143、145和184位氨基酸由磷酸化状态（Ser或Thr）转为非磷酸化状态（Ala）不影响EcaICE1与EcaHOS1的互作,而第158位磷酸化状态的改变,使EcaICE1与EcaHOS1的互作消失。（2）β-半乳糖苷酶活性检测结果显示:第143位氨基酸位点突变后,其半乳糖苷酶活性显著高于阳性对照,EcaICE1与EcaHOS1的蛋白互作强度明显增强。第145、184位氨基酸的位点突变,不影响EcaICE1与EcaHOS1的蛋白互作强度。第158位氨基酸的位点突变,其半乳糖苷酶活性显著低于阳性对照,且与阴性对照无显著差异,即EcaICE1与EcaHOS1的蛋白互作消失。（3）双分子荧光互补实验（BiFC）结果显示:四个磷酸化位点的突变不影响EcaICE1与EcaHOS1互作。（4）EcaICE1及其突变体重组载体的酵母低温实验表明:赤桉EcaICE1及其突变体的过表达能明显提高酿酒酵母的耐寒能力,但不同突变体转化的酵母之间耐寒能力无明显差异。（5）构建了EcaICE1及其四个不同磷酸化位点突变的EcaICE1S134A、EcaICE1T145A、EcaICE1S158A和EcaICE1S184A基因的超表达载体,通过农杆菌介导法转化拟南芥,进行表型形态、生理生化指标以及下游基因转录水平的比较分析。表型形态观测结果显示,各转化株系的表型与野生型株系及ice1突变体之间没有明显差异。4℃低温处理24h后,对于EcaICE1及其突变体的超表达植株,POD、SOD酶活性显著高于野生型和ice1突变体（P<0.05）;而MDA含量显著低于野生型和ice1突变体（P<0.05）。荧光定量PCR结果显示:EcaICE1及其突变体的转化植株中所有测试基因的表达水平均显著上调（P<0.05）,这表明EcaICE1及其突变体,能在拟南芥中正调节下游的冷响应基因表达。此外,在EcaICE1及其不同突变体转基因株系内,内源CBF3及其下游应答基因（COR15A,COR47和KIN1）的表达模式存在差异。