玉米ABP9瞬时表达体系建立及转ABP9基因玉米的创掉与鉴定

来源 :西南科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:spring2011
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干旱是限制玉米产量最主要的非生物逆境因素,每年因干旱造成的玉米减产甚至绝收,直接导致农业经济损失严重。因此,培育抗旱的玉米品种,对于在遭遇干旱等非生物逆境时保持玉米的高产稳产具有重要意义。本实验室前期在拟南芥中的研究得出,玉米抗逆相关转录因子ABP9通过正调控ABA信号转导以及参与ROS代谢调节,提高了植物对多种非生物逆境的耐受能力。本研究建立了玉米叶肉原生质体瞬时表达ABP9的体系,同时进行了玉米ABP9过表达及RNA干扰转基因植株的创制,以期揭示ABP9在玉米内源系统中的转录调控和基因功能,同时也为利用基因工程的手段培育抗旱玉米品种提供理论指导。本论文的研究工作主要结果如下:  1.通过优化PEG-Ca2+介导的玉米自交系齐319叶肉原生质体瞬时表达ABP9条件,可获得活力达90%左右的玉米叶肉原生质体,可使玉米原生质体转化效率达50%。  2.构建带有GFP报告基因的ABP9亚细胞定位载体pCAMBIA1303-35S-ABP9-GFP-Tnos,在建立的玉米叶肉原生质体体系中进行瞬时表达。结果表明,ABP9蛋白定位于细胞核,利用该系统证实了ABP9蛋白的核定位调控。  3.构建带有Flag标签ABP9genomic∷3Flag瞬时表达载体,利用该载体转化玉米叶肉原生质体建立瞬时表达ABP9体系,并在转录水平和翻译水平验证了该系统的有效性。  4.利用农杆菌介导的玉米幼穗侵染和胚性愈伤组织转化的方法,将ABP9过表达及ABP9RNA干扰载体导入玉米中,进行转基因玉米创制;利用草铵膦初筛-PCR检测-Southernblot分析验证的方法,对农杆菌介导转化的玉米转基因植株进行筛选验证,得到1株T2代ABP9过表达植株。
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