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通过RT-PCR方法,鉴定了狂犬病病毒rSRV9减毒株与亲本SRV9毒株的基因组结构差异性区别,扩增出了rSRV9减毒株基因组中插入的cytoc基因(369bp)。对连续培养的30代亲本SRV9病毒和拯救rSRV9病毒的病毒滴度和毒力的测定结果显示,亲本SRV9毒株与rSRV9减毒株的平均病毒滴度相差0.65logFFD50/0.1mL (P<0.01)、表明通过反向遗传学技术进行基因减毒修饰的rSRV9减毒株具有与亲本SRV9毒株相似的细胞内增殖能力。亲本SRV9毒株和rSRV9减毒株平均病毒毒力相比降低2.99logLD50/0.03mL (P<0.01),表明狂犬病rSRV9减毒株与亲本SRV9毒株相比毒力减弱。通过病理组织学和免疫组织化学检测出脑内注射亲本SRV9毒株和rSRV9减毒株死亡乳鼠脑神经细胞内的特异性Negri小体,表明脑内注射亲本SRV9毒株和rSRV9减毒株对乳鼠具有致病性。本实验采用薄膜分散法以氢化大豆卵磷脂、胆固醇、有机胺等物质为原料制备阳离子空白脂质体,再采用冻干技术将阳离子空白脂质体与rSRV9病毒等体积混合,加入冻干保护剂进行冻干,制成脂质体包裹狂犬病冻干口服活疫苗。通过电子显微镜观察到制备的空白脂质体形态为大单室脂质体,通过MASTER2000激光粒度仪检测空白脂质体平均粒径378nm,通过BCA蛋白定量法测定疫苗的抗原包封率为71.19%。本试验将狂犬病减毒脂质体口服冻干活疫苗,按不同免疫剂量、不同免疫次数和不同免疫方式,免疫平均体重25g小鼠。通过双抗夹心ELISA方法和MTT法,分别对免疫后1-7周的免疫小鼠口腔粘膜分泌型SIgA、血清狂犬病特异性IgG和脾脏淋巴细胞转化率进行检测。口服免疫3次,免疫剂量1.0mL,免疫后35d,小鼠SIgA抗体产生水平为38.63μg/mL,小鼠血清狂犬病特异性IgG含量为18.70ng/mL；脾脏淋巴细胞转化增殖OD值为1.86,免疫效果较好。最终确定了狂犬病减毒脂质体口服冻干活疫苗免疫小鼠最佳免疫剂量1.0mL(7.4logFFD50/0.1mL)；最佳免疫次数3次(第1天首次免疫、第7、14天加强免疫)。