【摘 要】
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为表达具有活性的N-豆蔻酰基转移酶(N-myristoyltransferase,NMT),用于口蹄疫病毒样颗粒组装效率的优化,将hNMT1基因克隆至pRSFDuet1表达载体,将其转化至大肠埃希氏菌BL21-Co
【机 构】
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黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江大庆 163319;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,国家口蹄疫参考实验室,甘肃兰州 730046;中国农业科学院兰州兽医研究所,家
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为表达具有活性的N-豆蔻酰基转移酶(N-myristoyltransferase,NMT),用于口蹄疫病毒样颗粒组装效率的优化,将hNMT1基因克隆至pRSFDuet1表达载体,将其转化至大肠埃希氏菌BL21-Coden-Plus(DE3)-RIL中,经IPTG诱导,并对诱导前细菌浓度、诱导剂浓度、诱导温度进行优化.目标蛋白经Ni2+亲和层析纯化后进行免疫印迹验证,荧光法测定其活性.结果显示,成功表达出hNMT1,在OD 600 nm值为1.0、IPTG浓度为0.5 mmol/L、表达温度为16℃时,hNMT1蛋白可溶性表达量最高,镍柱纯化后蛋白与抗His标签单克隆抗体在46 ku处特异性结合,与预测大小一致.确定了hNMT1表达的最适条件并成功制备出具有催化豆蔻酰化活性的hNMT1,为研究豆蔻酰化修饰对小RNA病毒蛋白衣壳装配的影响奠定了基础.
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