【摘 要】
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目的应用基于Chelex 100树脂的6种不同处理方法提取动物组织核酸,比较6种处理之间及与磁珠法之间的差异,筛选适用于现场检测、简便快速的动物组织基因组DNA提取方法。方法取
【机 构】
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中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生物控制室传染病预防控制国家重点实验室感染性疾病诊治协同创新中心; 山东第一医科大学; 山东大学生命科学学院;
【基金项目】
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国家科技重大专项(2017ZX10303404,2018ZX10712001);传染病预防控制国家重点实验室项目(2018SKLID802)~~
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目的应用基于Chelex 100树脂的6种不同处理方法提取动物组织核酸,比较6种处理之间及与磁珠法之间的差异,筛选适用于现场检测、简便快速的动物组织基因组DNA提取方法。方法取适量啮齿动物肝组织,研磨或剪碎后加入5%Chelex 100树脂悬液,应用6种不同的裂解与吸附步骤处理该悬液;经离心或静置处理后收获上清液即为组织基因组DNA,检测其浓度与纯度;以此DNA为模板,应用啮齿动物线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因的引物、巴尔通体通用引物和TaqMan探针扩增COⅠ基因片段和巴尔通体的tmRNA基因片段;比较6种Chelex100树脂处理方法之间及Chelex 100树脂法与磁珠法提取的基因组DNA浓度、纯度及扩增所得循环值(quantification cycle,Cq)的差异。结果基于Chelex 100树脂的6种不同处理方法(C1～C6)所获DNA模板浓度在203.93～769.86 ng/μl之间,比磁珠法提取的DNA模板浓度偏高;Chelex 100树脂法提取的DNA模板吸光度(A)值A260/A280比值在1.25～1.47之间,磁珠法的A260/A280比值在1.85～1.95之间,C1～C6之间无差别,但纯度低于磁珠法;电泳图显示,相较于磁珠法,Chelex 100树脂法提取的DNA模板没有明确DNA条带,前者DNA条带明显;COⅠ基因的扩增产物电泳带清晰且长度准确;对Chelex 100树脂法的DNA模板进行荧光定量PCR扩增,各样品均可获得正常Cq值,但略高于磁珠法。结论应用Chelex 100树脂法提取动物组织基因组DNA简便、高效,适用于常规PCR及TaqMan探针荧光定量PCR方法鉴定宿主动物及直接检测动物组织DNA中的病原体。
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