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目的
探讨人自然杀伤细胞(NK)高效扩增培养技术，以获得一种优化的诱导扩增临床应用级别NK细胞的方法。
方法提取健康人外周血单个核细胞(PBMCs)，应用免疫磁珠分选法(MACS)阴性分离出高纯度的CD3-CD56＋CD16＋NK细胞，采用X-VIVO培养基，在均含有白细胞介素(IL)-2、CD3单抗的基础上用不同的细胞因子组合对其进行体外扩增和诱导。采用细胞计数法、流式细胞术免疫表型分析比较NK细胞增殖后的数量与NK细胞纯度。
结果IL-7/IL-15/IL-21的优化组合刺激NK细胞增殖的效果为最佳，培养18 d可使经免疫磁性珠阴性纯化的NK细胞扩增124倍，使未经纯化的PBMCs细胞增殖108倍。在NK细胞纯度方面，培养18 d可使经免疫磁性珠阴性纯化的NK细胞扩增后的CD3-CD16＋CD56＋ NK细胞纯度达81.5%，CD3＋CD16＋CD56＋ NK细胞阳性率为10.3%，NK细胞总纯度为91.8%；使未经纯化的PBMC细胞扩增后的CD3-CD16＋CD56＋ NK细胞纯度达22.1%，CD3＋CD16＋CD56＋NK细胞阳性率为33.5%，NK细胞总纯度为55.6%。而单用不同细胞因子IL-7、IL-15、IL-21对NK细胞扩增数量和纯度均有所不同。
结论采用X-VIVO培养基，在IL-2、CD3单抗的基础上加IL-7/IL-15/IL-21的优化组合刺激NK细胞增殖的数量和纯度达到最佳效果，所产生的NK细胞质量可满足临床细胞免疫治疗抗肿瘤应用的需要。