酶联免疫斑点检测技术(enzyme-link immunospot assay,ELISpot)是近年来发展起来的检测细胞因子免疫学检测技术,是在酶联免疫吸附技术(ELISA)基础上与细胞培养技术充分结合而建立起来的一种可以在体外检测单细胞水平培养的特异性抗体分泌细胞的新型检测技术,此技术可以快捷、简便的对细胞因子分泌量进行定量,目前已经成为国际公认的抗原特异性T细胞免疫学研究的主流技术.由此可以预见,该检测方法在动物免疫研究领域将会得到广泛应用,发挥其重要作用.但是,此项技术尚未形成标准化,对细胞含量、细胞浓度、孵育、显色时间等优化条件还没有形成完整体系.因此,在检测工作实践中,总结实验操作步骤注意事项,提高检测水平,对提高ELISpot技术检测的准确性以及对各个因素进行优化,建立稳定的检测体系具有重要意义.总之，随着ELISpot 技术的不断发展，此技术在动物疫病诊断的领域也将更加广泛深入，近几年利用ELISpot技术对猪蓝耳病、口蹄疫的研究层出不穷，ELISpot技术即将成为基础实验室及兽医诊断实验室的标准技术。试剂质量、细胞质量、人员操作、主观判定等都是影响此项检测技术结果准确与否的主要因素。正确的实验方法和操作细节对ELISpot在兽医领域的研究和诊断意义重大。