腺病毒载体介导NGF基因转染大鼠肌源性干细胞的实验研究

来源 :国际泌尿系统杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ztlzp
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目的:探讨腺病毒载体介导神经生长因子(NGF)体外转染大鼠肌源干细胞(MDSCs)应用于基因治疗的可行性。方法:培养并纯化MDSCs细胞株,采用具有高效转染能力的腺病毒载系统将NGF基因导入MDSCs中,采用绿色荧光蛋白(EGFP)荧光技术检测转染率、实时荧光定量PCR (qPCR)检测目的基因NGF的表达情况。结果:腺病毒感染MDSCs的感染复数为1000时最佳,感染率可达80%。EGFP自72 h时荧光表达开始逐渐增强。转染的MDSCs中NGF基因高表达。结论:通过携带NGF的腺病毒载体可以成功转染MDSCs,从而上调目的基因在肌源干细胞中的表达;且通过腺病毒介导转染的目的基因NGF不会导致肌源干细胞的过度增殖和凋亡。“,”Objective:To investigate the feasibility of gene therapy using adenovirus vector mediated nerve growth factor(NGF) gene transfection with rat muscle-derived stem cells(MDSCs) in vitro.Methods:MDSCs were isolated, cultured and identified in vitro.The adenoviral vector system was utilized to introduce NGF gene into MDSCs.Expression of NGF and its downstream target proteins were detected by real-time quantitative PCR(qPCR). EGFP marker was used to determine the expression of NGF after transection.Results:MDSCs were infected with adenovirus at a multiplicity of infection(MOI) of 1000 with optimal expression efficiency of 80%.EGFP marker was observed at 72 hours after transfection and then gradually enhanced.NGF gene was highly expressed in the transfected MDSCs.Conclusions:The adenoviral vector carrying NGF is successfully transfected into MDSCs and stably expressed, which up-regulates the expression of target gene in MDSCs and provides a theoretical foundation for therapy of stress urinary incontinence(SUI). Moreover, this transfection method does not lead to excessive proliferation and apoptosis of MDSCs.
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