【摘 要】
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目的:研究原代小型猪肝细胞微载体培养方法的建立、肝细胞功能特性及其安全性.方法:将3.20×107个的肝细胞及2g/LcytodexTM3微载体连同40mL含100mL/LHyclone小牛血清及其他附
【机 构】
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中国人民解放军第302医院感染二科,中国人民解放军第302医院感染二科,中国人民解放军第302医院传染病研究所生物工程研究室,中国人民解放军第302医院传染病研究所生物工程研究室,中国人民解放军第30
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目的:研究原代小型猪肝细胞微载体培养方法的建立、肝细胞功能特性及其安全性.方法:将3.20×107个的肝细胞及2g/LcytodexTM3微载体连同40mL含100mL/LHyclone小牛血清及其他附助因子的RPMI1640培养基加入250mL已硅化的方瓶中培养.对不同培养时间的肝细胞进行形态学观察.同时测定不同培养时期肝细胞生物合成及生物转化功能,并对培养上清进行质控实验.结果:肝细胞产量为6.8×109-8.1×109(7.58±0.57)×109/肝;肝细胞活率为92-99%(96±3%);肝细胞具有正常肝细胞的超微结构特征;接种培养后肝细胞呈明显的朝CytodexTM3聚集,二者易相粘贴,黏附在微载体上的肝细胞增生生长较旺盛;当肝细胞数为3.20×107个时,接种后24h肝细胞尿素及白蛋白的合成量分别为1.22mmol/L及0.075g/L;随着时间的延长,利多卡因的转化率逐渐增加,在24h时即达到100%;培养上清需氧、厌氧、真菌培养、支原体检查及热源实验均为阴性.结论:使用微载体培养的小型猪肝细胞具有较旺盛的增生生长能力、良好的生物转化及生物合成功能,同时又是安全可靠的,可作为体外生物人工肝较为理想的细胞来源.
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