【摘 要】
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目的 探讨Toll样受体7激动剂咪喹莫特诱导人胃癌细胞SGC-7901发生自噬及其可能的机制.方法 体外培养人胃癌细胞株SGC-7901,给与不同浓度咪喹莫特(0,25,50,100μg/ml)处理24 h,RT-PCR及Western blot法检测LC3Ⅱ、Bec-lin1及p62 mRNA和蛋白表达水平变化.透射电镜下观察100μg/ml咪喹莫特作用12 h自噬小体的形成.不同浓度咪喹莫特处理SGC-7901细胞24 h,Western blot法观察Akt/mTOR通路相关蛋白Akt、mTOR及p
【机 构】
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西安交通大学第二附属医院消化内科,西安 710004
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目的 探讨Toll样受体7激动剂咪喹莫特诱导人胃癌细胞SGC-7901发生自噬及其可能的机制.方法 体外培养人胃癌细胞株SGC-7901,给与不同浓度咪喹莫特(0,25,50,100μg/ml)处理24 h,RT-PCR及Western blot法检测LC3Ⅱ、Bec-lin1及p62 mRNA和蛋白表达水平变化.透射电镜下观察100μg/ml咪喹莫特作用12 h自噬小体的形成.不同浓度咪喹莫特处理SGC-7901细胞24 h,Western blot法观察Akt/mTOR通路相关蛋白Akt、mTOR及p70S6K表达水平变化.观察联合应用组(100μg/ml咪喹莫特加100 nmol/L mTOR抑制剂雷帕霉素)与对照组(100μg/ml咪喹莫特)LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表达变化,MTT法检测两组细胞增殖活性的改变.结果 不同浓度咪喹莫特作用24 h,SGC-7901细胞LC3Ⅱ和Beclin1 mRNA及蛋白表达水平上调,且随浓度增加表达水平相应上升(均P=0.000),p62 mRNA及蛋白表达水平随浓度增加依次下降(均P=0.000).100μg/ml咪喹莫特作用12 h,透射电镜下可观察到典型的自噬形态学改变.不同浓度咪喹莫特作用24 h,Akt/mTOR信号通路相关蛋白Akt及mTOR磷酸化减少、其下游信号分子p70S6K表达下降.与对照组相比,联合应用雷帕霉素组LC3Ⅱ和Beclin1表达水平上升,而细胞增殖活性显著下降(P<0.05).结论 咪喹莫特能够诱导SGC-7901细胞发生自噬,其可能的机制是通过抑制Akt/mTOR信号通路实现的.
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