【摘 要】
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目的 探讨表达不同氨基端二级结构的丙型肝炎病毒非结构蛋白3/4A(HCV NS3/4A)各亚型丝氨酸酶活性及其对宿主细胞功能抑制作用的差异.方法 以pSG5/M-H05-5/4A为模板(A1-1),构
【机 构】
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兰州军区兰州总医院中心实验室,Department of Microbiology
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目的 探讨表达不同氨基端二级结构的丙型肝炎病毒非结构蛋白3/4A(HCV NS3/4A)各亚型丝氨酸酶活性及其对宿主细胞功能抑制作用的差异.方法 以pSG5/M-H05-5/4A为模板(A1-1),构建表达不同氨基端二级结构NS3/4A的点突变质粒,并分别命名为A1-2,A2-1,A2.2,B1-1,B1-2,B2-1,B2-2.Western印迹检测所有构建质粒的表达及各亚型顺式及反式NS3蛋白酶活性的差异.荧光素酶报告试验检测pSG5/M-H05-5/4A各个二级结构亚型对干扰素-β(IFN-β)产生及p53依赖的荧光素酶基因的转录活性的抑制作用以及各亚型之间抑制作用的差异.结果 Western印迹显示所有构建质粒均成功表达,而且A2-1和B2-1亚型NS3/4A存在不完全切割现象.表明与其他亚型相比,A2-1和B2-1顺式NS3丝氨酸蛋白酶活性较弱.与其底物NS5A/5BAC共表达后,A2-1和B2-1亚型未切割NS5A5B明显多于其他亚型,而切割 NS5A 则明显少于其他亚型.说明与其他亚型相比,A2-1和B2-1 亚型的反式NS3蛋白酶活性亦较弱.荧光素酶试验结果显示,所有亚型M-H05-5/4A均显著抑制IFN-β启动子活性(P＜0.01)和p53依赖的荧光素酶基因的转录活性(P＜0.01),A2-1和B2-1亚型的抑制作用显著弱于其他亚型(P＜0.05).结论 氨基端不同二级结构的HCV NS3/4A复合体具有不同的丝氨酸酶活性和宿主细胞功能抑制作用.
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