【摘 要】
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为研制一种高效、快捷、灵敏的禽腺病毒血清4型(FAdv-4)检测试剂盒,本研究根据FAdv-4的保守序列设计了一对引物及探针,并在下游引物标记FITC,探针标记Biotin,应用纳米PCR技术
【机 构】
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天津市畜牧兽医研究所,天津 300381农业农村部兽用药物与诊断技术天津科学观测实验站,天津 300381;天津市畜禽健康养殖技术工程中心,天津 300381;天津市畜牧兽医研究所,天津 300381
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为研制一种高效、快捷、灵敏的禽腺病毒血清4型(FAdv-4)检测试剂盒,本研究根据FAdv-4的保守序列设计了一对引物及探针,并在下游引物标记FITC,探针标记Biotin,应用纳米PCR技术结合横向流动试纸条技术(LFD),优化反应及杂交条件后建立了检测FAdv-4的纳米PCR-LFD方法,并组装了FAdv-4纳米PCR检测试剂盒.同时对试剂盒进行了特异性、敏感性、批内批间可重复性、稳定性、保存期评估等试验及临床样品检测.特异性试验表明,此试剂盒能够特异性检测出FAdv-4,而对于禽的其他主要病毒性及细菌性病原如鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)、鸡马立克病病毒(MDV)、鸡减蛋综合征病毒(EDSV)、鸭瘟病毒(DPV)、新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒H9亚型(AIV(H9))、禽呼肠孤病毒(ARV)、FAdv标准株(FAdv-1、FAdv-2、FAdv-8a、FAdv-8b和FAdv-11)、鸡大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(SA)、鸡白痢沙门氏菌(SP)、鸡毒支原体(MG)的检测结果均为阴性.敏感性试验表明,此试剂盒的敏感性比常规PCR方法敏感10倍,最低核酸拷贝数检出量可以达到56.0拷贝/μL.试剂盒的批内、批间检测结果具有良好的一致性和稳定性.稳定性试验结果说明试剂盒至少可以耐受20次的反复冻融,依然有很好的检测效果.保存期试验证实,试剂盒在4℃条件下至少可以保存3个月,在-20℃条件下至少可保存12个月.此试剂盒实现了对FAdv-4检测结果的可视化,简化了操作流程,提高了检测效率.对天津及周边地区临床送检的117份样品检测结果显示,FAdv-4阳性率为17.95％(21/117).本试验研制的试剂盒可用于FAdv-4的临床诊断和分子流行病学调查,对养禽场FAdv-4感染的早期检测与制定综合防控措施提供了重要的技术支撑.
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