【摘 要】
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目的研究李斯特菌溶血素的主要功能,比较两种李斯特菌——绵羊李斯特菌(Listeria ivanovii, LI)和单增李斯特菌(Listeria monocytogenes, LM)的溶血素对细菌黏附细胞等作用的
【机 构】
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四川大学华西公共卫生学院卫生检验与检疫系; 四川大学华西公共卫生学院公共卫生与预防医学实验中心;
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目(No.31570924);四川省科技厅国际合作项目(No.2017HH0080)资助
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目的研究李斯特菌溶血素的主要功能,比较两种李斯特菌——绵羊李斯特菌(Listeria ivanovii, LI)和单增李斯特菌(Listeria monocytogenes, LM)的溶血素对细菌黏附细胞等作用的强弱。方法构建含有LI i-hly基因上、下游同源序列和lacZ基因或hly基因的打靶质粒,利用基因重组技术构建LI溶血素(ILO)缺陷的LI重组菌株LIΔi-hly∷lacZ和回补表达LM溶血素(LLO)的重组菌株LIΔi-hly∷hly;比较2株重组菌与野生LI对人肝癌HepG2细胞的黏附、侵袭能力;比较3株菌在巨噬细胞RAW264.7内的增殖能力。结果重组菌株LIΔi-hly∷lacZ和LIΔi-hly∷hly的基因序列与预期相符;LIΔi-hly∷hly、LI和LIΔi-hly∷lacZ对HepG2细胞的黏附率分别为(3.43±0.82)%、(3.43±1.59)%和(3.41±1.12)%,侵袭率分别为(1.74±0.46)%、(1.22±0.75)%和(1.39±0.46)%,差异均无统计学意义;胞内增殖实验结果表明,与野生株相比,ILO缺陷株LIΔi-hly∷lacZ在巨噬细胞内的增殖量降低,LIΔi-hly∷hly的增殖量升高。结论 LI在细胞内的增殖水平与ILO有关,ILO缺失抑制了LI在细胞内的增殖能力,LM溶血素LLO协助细菌逃离吞噬泡进入宿主细胞质的能力强于LI溶血素ILO。
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