【摘 要】
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目的 采用体外细胞共培养技术模拟骨微环境,探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的影响,并探讨其机制.方法 骨髓基质细胞HS-5与MDA-MB-231细胞在Tran-swell共培养体系中分别加入磷酸盐缓冲液(对照组)和重组BMP9蛋白(100 ng/mL)(实验组),培养2 d后,细胞划痕实验检测MDA-MB-231细胞迁移能力的改变;Transwell细胞侵袭实验检测MDA-MB-231细胞侵袭能力的改变;采用Western blot及明胶酶谱法分别检测MDA-M
【机 构】
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陕西省西安市第一医院检验科,陕西西安 710002;陕西省西安市第一医院心血管内科,陕西西安 710002;陕西省西安市儿童医院检验科,陕西西安 710003
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目的 采用体外细胞共培养技术模拟骨微环境,探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的影响,并探讨其机制.方法 骨髓基质细胞HS-5与MDA-MB-231细胞在Tran-swell共培养体系中分别加入磷酸盐缓冲液(对照组)和重组BMP9蛋白(100 ng/mL)(实验组),培养2 d后,细胞划痕实验检测MDA-MB-231细胞迁移能力的改变;Transwell细胞侵袭实验检测MDA-MB-231细胞侵袭能力的改变;采用Western blot及明胶酶谱法分别检测MDA-MB-231细胞基质金属蛋白酶(MMP)9、MMP2蛋白表达及相对活性的改变;采用Western blot检测HS-5和MDA-MB-231两种细胞中基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及MDA-MB-231细胞中趋化因子受体4(CXCR4)和细胞信号通路P-Akt表达的变化.结果 在共培养体系中加入BMP9后,划痕实验结果 显示,对照组和实验组MDA-MB-231细胞平均愈合率分别为(84.28±2.54)％、(44.49±4.86)％;Transwell细胞侵袭实验结果 显示,对照组和实验组MDA-MB-231细胞穿膜细胞数分别为481±22、121±11,BMP9对共培养体系中MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭有明显抑制作用(P<0.05).实验组MDA-MB-231细胞MMP9、MMP2的蛋白表达分别为0.10±0.01、0.11±0.03,较对照组的0.79±0.03、0.82±0.05明显下调,差异均有统计学意义(P<0.05),实验组MMP9、MMP2相对活性分别为0.14±0.03、0.12±0.02,较对照组的0.90±0.07、1.04±0.14均明显下调,差异均有统计学意义(P0.05);实验组P-Akt蛋白表达(0.09±0.01)较对照组(0.48±0.07)明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);实验组HS-5细胞中SDF-1蛋白表达(0.14±0.01)较对照组(0.42±0.06)明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 在模拟骨微环境的共培养体系中,BMP9可能通过SDF-1/CXCR4-PI3K信号通路抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭.
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