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根据灰盖鬼伞漆酶基因 LCC 1的蛋白序列和毕赤酵母的密码子偏爱性设计并合成 CCLCC 1 I 基因片段,将其连接到经过改造的 pPIC9K 质粒上构建分泌表达载体 pYN2395;构建好的载体经 Bgl Ⅱ酶切线性化后电激转化到毕赤酵母 GS115中,通过 ABTS 底物显色反应筛选获得阳性转化子。从培养基、发酵温度、铜离子浓度和甲醇添加量等方面对重组酵母的发酵条件进行了研究。结果显示:添加0.6%的丙氨酸能极大地提高灰盖鬼伞漆酶的表达量,并确定最终优化组合为:培养基使用 MMA,发酵温度为20℃,铜