【摘 要】
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目的利用慢病毒包装构建过表达小窝蛋白-1（Caveolin-1）的稳定细胞株。方法 PCR扩增仓鼠肾细胞BHK-21中Caveolin-1基因,克隆至pTRIP-CMV载体中,构建重组表达质粒pTRIP-Cav1,将其与对照质粒pTRIP-EGFP分别经LipofectamineTM2000介导转染HEK-293T细胞,收集包装的慢病毒并转导至BHK-21细胞,构建过表达Caveolin-1的细胞
【机 构】
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西北民族大学生物医学研究中心生物工程与技术国家民委重点实验室
【基金项目】
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甘肃省教育厅项目（2018B-018）； 中央高校基本科研业务项目（31920180123）； 西北民族大学引进人才科研启动项目（xbmuyjrc-201627）；
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目的利用慢病毒包装构建过表达小窝蛋白-1（Caveolin-1）的稳定细胞株。方法 PCR扩增仓鼠肾细胞BHK-21中Caveolin-1基因,克隆至pTRIP-CMV载体中,构建重组表达质粒pTRIP-Cav1,将其与对照质粒pTRIP-EGFP分别经LipofectamineTM2000介导转染HEK-293T细胞,收集包装的慢病毒并转导至BHK-21细胞,构建过表达Caveolin-1的细胞株BHK-Cav1及过表达绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）的对照细胞株BHK-EGFP。Western blot、qRT-PCR、免疫荧光法验证细胞株的稳定性及过表达特性,同时检测细胞活力。结果经双酶切及测序鉴定,重组表达质粒pTRIP-Cav1构建正确。与BHK-21细胞比较,各代次BHK-EGFP细胞中EGFP荧光明显,BHKCav1细胞中Caveolin-1蛋白表达水平增加,mRNA水平显著增加（P <0.01）,且表达水平不随细胞代次的增长而改变。BHK-Cav1和BHK-EGFP细胞活力与BHK-21细胞比较,差异均无统计学意义（P均> 0.05）。结论成功构建了Caveolin-1过表达细胞株BHK-Cav1,其具有较好的稳定性,为下一步研究病毒通过Caveolin依赖型内吞途径感染BHK-21细胞奠定了基础。
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