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从NCBI的dbEST数据库中下载假臭草同族植物的EST序列,经EST序列处理及SSR位点查询,首次设计了27对假臭草EST-SSRs引物,以海南省文昌市假臭草 DNA为模板,采用单因素和L16(45)正交试验对其EST-SSRs PCR反应体系进行优化。建立了假臭草EST-SSRs最佳20μLPCR反应体系: Mg2+浓度为2.75 mmol/L,模板DNA用量为35 ng, Tag DNA聚合酶为2.25 U, dNTPs浓度为0.3 mmol/L,引物浓度为0.6μmmol/L。并用14个不同来源的