【摘 要】
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目的 研究以包涵体形式表达的重组同型半胱氨酸α,γ-裂解酶的表达、纯化,对其活性进行检测并对其酶学性质进行表征.方法 将同型半胱氨酸α,γ-裂解酶的重组表达载体pET-15 b
【机 构】
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常州大学制药与生命科学学院,常州英赞美科生物科技有限公司,华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科
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目的 研究以包涵体形式表达的重组同型半胱氨酸α,γ-裂解酶的表达、纯化,对其活性进行检测并对其酶学性质进行表征.方法 将同型半胱氨酸α,γ-裂解酶的重组表达载体pET-15 b/rHCYase转化大肠埃希菌BL21中,进行优化大量表达.使用Ni2亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,再通过His-Trap脱盐柱脱盐,采用MBTH法检测目的蛋白活性,并对该酶进行了表征.结果 重组蛋白在大肠埃希菌中可以高效表达,产量为204 mg·L-1,比活约206 U·mg-1.相对分子质量为45 200.重组酶的最适反应温度为35℃,酶活性稳定的温度范围为20～35℃.重组酶的最适反应pH为7.5,4℃下在pH7.5的缓冲溶液中保温5h酶稳定性最高.结论 成功克隆和表达了rHCYase蛋白,并得到高产高酶活的可溶性蛋白,对同型半胱氨酸检测试剂的开发有一定的潜在应用价值.
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