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[摘 要]目的 研究整合素连接激酶（integrin-linked kinase ，ILK）在肾癌中的表达及意义 方法 利用免疫组织化学S-P法检测40例肾癌和20例正常肾组织中ILK的表达，并与临床分期进行比较。结果 40例肾癌中，ILK蛋白阳性表达率为82.5%（33/40），而20例正常肾组织中ILK蛋白表达率为25%（5/20）；ILK的表达与肾癌的临床分期有关。结论 ILK在肾癌中异常活性表达，并与临床分期相关，可能成为治疗肾癌的新靶点。
关键词：肾肿瘤 整合素连接激酶 免疫组织化学；
Expression and significance of Integrin-linked kinase in renal cell carcinomaZHENG xing-ming1，TANG xian-fu1，LAN jian-hua1，WANG de-lin2（1 North Sichuan Medical College， Guang City People's Hospital，guang an Sichuan，638000；2Departmeof Urology， the First Affiliated Hospital， Chongqing Medical University， Chongqing 400016， China）
Abstract: Objective To investigate the expression and significance of integrin-linked kinase in primary renal cell carcinoma（RCC）. Methods Immuno-histochemistry was used to detect the expression of ilk in 40 cases of RCC and 20 cases of renal tissue．The correlation between the expression in RCC and clinicopathological stage examined. Results 40 cases of renal cell carcinoma， ILK protein expression was 82.5% （33/40）， and 20 cases of normal renal tissue expression of ILK protein was 25% （5 / 20）; ILK expression was related with clinical stage renal cell carcinoma. Conclusion Abnormal activity of ILK expression in renal cell carcinoma， and was related with the clinical stage， may become a new target for treatment of renal cell carcinoma.
【key words】Kidney NeoplasmsIntegrin-linked kinase Immunohistochemistry
中图分类号：R737.11 文献标识码：B文章编号：1004-7484（2011）03-0041-04
肾癌在成人泌尿生殖系统肿瘤中发病率仅次于膀胱癌，易发生转移，发病率近年有增高趋势，肾癌对放、化疗不敏感，其生物治疗为近年研究热点。整合素连接激酶（integrin-linked kinase，ILK）是一个具有Ser/Thr蛋白激酶活性的细胞内蛋白，可被整合素或生长因子以依赖于PI-3K的方式激活，并通过磷酸化激活下游底物PKB/Akt和GSK-3β等使细胞外信号得以向下游传递，调节细胞的生长、增殖、分化和凋亡[1]。本研究初步探讨ILK在肾癌中的表达情况及与临床分期之间的关系。
1材料与方法
1.1 一般资料
40例肾细胞癌石蜡包埋切片组织取自广安市人民医院及重庆医科大学附属第一医院泌尿外科2008年1月～2010年5月肾癌手术患者，均行病理诊断确诊。40例患者中男27例，女13例；年龄25～68岁，中位年龄54.3岁；早期肾癌（局限性肾癌，T1 及T2期）18例；中、晚期肾癌（局部进展性肾癌及转移性肾癌，T3 及T4期）22例。全部病例施行手术治疗。对照组20例正常肾组织均取自远离肿瘤的肾组织。
1.2 主要试剂
ILK鼠抗人单克隆抗体购自美国Santa Cruz生物技术公司，工作浓度为1:150。SP试剂盒购自晶美生物有限公司。
1.3 免疫组化染色
组织标本用甲醛溶液固定，常规石蜡包埋、切片，切片厚度3～4um。采用链菌素亲生物素-过氧化酶连接法（SP法）染色，DAB显色5 min。PBS液代替一抗作阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照。
1.4 染色结果判定
判定标准参考文献[2-3]：ILK阳性蛋白表达定位于细胞浆，阳性细胞积分：染色细胞数<10% 为0分，染色细胞数为10% ～50% 为1分，染色细胞数为50％～90%为2分，染色细胞数>90%为3分。染色强度积分：无染色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。阳性细胞及染色强度积分之和：≤3分为阴性（-），≥4分为阳性（+）。
1.5 统计学方法
采用SPSS12.0软件进行统计学分析，选用χ2检验处理统计结果。
2结 果
2.1 肾癌组织和正常肾组织中ILK表达
40例肾癌组织中，ILK蛋白表达阳性率为82.5%（33/40），20例癌正常肾组织ILK蛋白表达率为25%（5/20），二者比较差异有显著性 （P<0.01）（表1）。镜下可见ILK阳性染色主要定位于肿瘤细胞胞浆内，显色为棕黄或棕褐色，正常肾组织极少数肾小球上皮细胞ILK有少量表达，而远端小管、近曲小管中几乎没有ILK的表达（图1）。
2.2ILK表达与肾癌临床分期的关系
早期肾癌组ILK阳性表达12例（66.7％），晚期肾癌组ILK阳性表达21例（95.5％），晚期肾癌组ILK表达明显高于早期肾癌组，经χ2检验差异有统计学意义（χ2=3.864，P<0.05）（表2）。
3 讨论
ILK是1996年Hannigan[4]发现的一丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，参与多种信号传导通路。大量研究表明，ILK的过度表达与前列腺癌[2]、卵巢癌[5] 、结肠癌[6]、胃癌[7]等多种恶性肿瘤的发生发展密切相关，认为其能够通过多种途径抑制细胞凋亡，促进细胞增殖，从而导致肿瘤发生。将过度表达ILK的前列腺癌上皮细胞导入裸鼠内能快速形成肿瘤，肿瘤细胞显示为高度侵袭性 [8]；抑制ILK的表达可导致肿瘤细胞周期停滞和肿瘤细胞凋亡，肿瘤生长被抑制，提示ILK可能可能为一癌基因。
有关ILK与肾脏疾病关系的研究主要集中于慢性肾炎、肾小球硬化、肾间质纤维化、糖尿病肾病等内科疾病[9]，ILK与肾癌的关系研究较少。肾癌是一起源于肾小管上皮细胞的恶性肿瘤，本研究结果发现，ILK在肾癌中表达水平显著高于对照组正常肾组织（P<0．01），ILK在肾癌组织中主要表达于癌细胞的胞浆中，在对照组正常肾组织多为阴性表达，极少数肾小球上皮细胞ILK有少量表达，而远端小管、近曲小管中几乎没有ILK的表达，提示ILK可能与肾癌的发病密切相关。ILK导致肿瘤形成主要机制有：①ILK能通过细胞骨架蛋白rictor蛋白促进AKT磷酸化导致肿瘤细胞形成[10]；②ILK活化或过表达也能磷酸化抑制GSK-3β，使β-连接蛋白不能被磷酸化而在胞质中累积。β-连接蛋白被认为是一种癌基因，过多的β-连接蛋白能使E-钙黏附蛋白-连接蛋白复合体功能丧失，从而导致肿瘤形成[11]。此外，ILK激活或过表达也能上调一系列癌基因和间充质细胞表型相关基因的表达，如使细胞周期蛋白cyclin D1，c-myc等表达增高，从而促进细胞增殖[12]。
肾癌是一种较易发生转移的肿瘤，临床上诊断时往往有30％的患者已发生了转移，其转移方式主要是淋巴和血行转移。本组研究通过检测早期和晚期肾癌组织ILK的表达，发现ILK的表达肾癌组织临床分期相关，ILK在晚期肾癌组的阳性表达明显高于早期肾癌，提示过表达的ILK可能促进了肾癌的浸润和转移。研究发现，ILK能通过降低肿瘤细胞间黏附力、降解ECM促进肿瘤细胞浸润和转移[13]。
本组研究在肾癌中发现了ILK的异常表达，其与肾癌的临床分期相关，参与了肾癌的发生发展。近期研究发现ILK能促进肿瘤血管形成，抑制ILK可导致肿瘤缩小，对于肾癌的治疗无疑又是一个新的切入点，ILK可能成为治疗肾癌的新靶点。
参考文献
[1] Naska S， Park KJ， Hannigan GE， et al．An essential role for the integrin-linked kinase -glycogen synthase kinase-3 beta pathway during dendrite initiation and growth [J]．J Neurosci， 2006， 26（51）: 13344-13356.
[2] Graff JR， Deddens JA， Konicek BW， et al. ILK as a potential marker gene to ascertain specific adenocarcinoma cell mRNA isolation from frozen prostate biopsy tissue sections [J]. Int J Oncol， 2005， 26（6）: 1549-1558.
[3] Marotta A， Parhar K， Owen D， et al. Characterisation of integrin-linked kinase signalling in sporadic human colon cancer [J]. Br J Cancer， 2003， 88（11）: 1755-1762.
[4] Hannigan G， Troussard AA， Dedhar S. et al. Integrin—linked kinase ; a cancer therapeutic target unique among its ILK[J]. Nat Rev Cancer， 2005， 5（1）:51-63.
[5] Ahmed N， Riley C， Oliva K， et al. Integrin-linked kinase expression increases with ovarian tumour grade and is sustained by peritoneal tumour fluid[J].J Pathol， 2003， 201（2）:229-237.
[6] Assi K， Mills J， Owen D， et al. Integrin-linked kinase regulates cell proliferation and tumour growth in murine colitis-associated carcinogenesis[J]. Gut，2008，57（7）:931-940.
[7] Kim YB， Lee SY， Ye SK. Epigenetic regulation of integrin-linked kinase expression depending on adhesion of gastric carcinoma cells[J]. Am J Physiol Cell Physiol. 2007，292（2）:C857-66.
[8] McDonald PC， Fielding AB， Dedhar S， et al. Integrin-linked kinase--essential roles in physiology and cancer biology [J]. J Cell Sci， 2008， 121（Pt 19）: 3121-3132.
[9] Li Y， Tan X， Dai C， Stolz DB， Wang D， Liu Y. Inhibition of integrin-linked kinase attenuates renal interstitial fibrosis. J Am Soc Nephrol. 2009，20（9）:1907-19018.
[10] McDonald PC， Oloumi A， Mills J， et al. Rictor and integrin-linked kinase interact and regulate Akt phosphorylation and cancer cell survival. Cancer Res， 2008， 68（6）:1618-1624.
[11] McDonald PC， Oloumi A， Mills J， et al. Rictor and integrin-linked kinase interact and regulate Akt phosphorylation and cancer cell survival. Cancer Res， 2008， 68（6）:1618-1624.
[12]Werner C， Böhm M， Friedrich EB. Role of integrin-linked kinase for functional capacity of endothelial progenitor cells in patients with stable coronary artery disease. Biochem Biophys Res Commun. 2008，377（2）:331-6.
[13]Du Y， Yang C， Zhang X， Zhang L. Expression and significance of integrin beta1 and integrin-linked kinase in laryngeal carcinoma. Lin Chung Er Bi Yan Hou Tou Jing Wai Ke Za Zhi. 2008 Jun;22（11）:500-3.
关键词：肾肿瘤 整合素连接激酶 免疫组织化学；
Expression and significance of Integrin-linked kinase in renal cell carcinomaZHENG xing-ming1，TANG xian-fu1，LAN jian-hua1，WANG de-lin2（1 North Sichuan Medical College， Guang City People's Hospital，guang an Sichuan，638000；2Departmeof Urology， the First Affiliated Hospital， Chongqing Medical University， Chongqing 400016， China）
Abstract: Objective To investigate the expression and significance of integrin-linked kinase in primary renal cell carcinoma（RCC）. Methods Immuno-histochemistry was used to detect the expression of ilk in 40 cases of RCC and 20 cases of renal tissue．The correlation between the expression in RCC and clinicopathological stage examined. Results 40 cases of renal cell carcinoma， ILK protein expression was 82.5% （33/40）， and 20 cases of normal renal tissue expression of ILK protein was 25% （5 / 20）; ILK expression was related with clinical stage renal cell carcinoma. Conclusion Abnormal activity of ILK expression in renal cell carcinoma， and was related with the clinical stage， may become a new target for treatment of renal cell carcinoma.
【key words】Kidney NeoplasmsIntegrin-linked kinase Immunohistochemistry
中图分类号：R737.11 文献标识码：B文章编号：1004-7484（2011）03-0041-04
肾癌在成人泌尿生殖系统肿瘤中发病率仅次于膀胱癌，易发生转移，发病率近年有增高趋势，肾癌对放、化疗不敏感，其生物治疗为近年研究热点。整合素连接激酶（integrin-linked kinase，ILK）是一个具有Ser/Thr蛋白激酶活性的细胞内蛋白，可被整合素或生长因子以依赖于PI-3K的方式激活，并通过磷酸化激活下游底物PKB/Akt和GSK-3β等使细胞外信号得以向下游传递，调节细胞的生长、增殖、分化和凋亡[1]。本研究初步探讨ILK在肾癌中的表达情况及与临床分期之间的关系。
1材料与方法
1.1 一般资料
40例肾细胞癌石蜡包埋切片组织取自广安市人民医院及重庆医科大学附属第一医院泌尿外科2008年1月～2010年5月肾癌手术患者，均行病理诊断确诊。40例患者中男27例，女13例；年龄25～68岁，中位年龄54.3岁；早期肾癌（局限性肾癌，T1 及T2期）18例；中、晚期肾癌（局部进展性肾癌及转移性肾癌，T3 及T4期）22例。全部病例施行手术治疗。对照组20例正常肾组织均取自远离肿瘤的肾组织。
1.2 主要试剂
ILK鼠抗人单克隆抗体购自美国Santa Cruz生物技术公司，工作浓度为1:150。SP试剂盒购自晶美生物有限公司。
1.3 免疫组化染色
组织标本用甲醛溶液固定，常规石蜡包埋、切片，切片厚度3～4um。采用链菌素亲生物素-过氧化酶连接法（SP法）染色，DAB显色5 min。PBS液代替一抗作阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照。
1.4 染色结果判定
判定标准参考文献[2-3]：ILK阳性蛋白表达定位于细胞浆，阳性细胞积分：染色细胞数<10% 为0分，染色细胞数为10% ～50% 为1分，染色细胞数为50％～90%为2分，染色细胞数>90%为3分。染色强度积分：无染色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。阳性细胞及染色强度积分之和：≤3分为阴性（-），≥4分为阳性（+）。
1.5 统计学方法
采用SPSS12.0软件进行统计学分析，选用χ2检验处理统计结果。
2结 果
2.1 肾癌组织和正常肾组织中ILK表达
40例肾癌组织中，ILK蛋白表达阳性率为82.5%（33/40），20例癌正常肾组织ILK蛋白表达率为25%（5/20），二者比较差异有显著性 （P<0.01）（表1）。镜下可见ILK阳性染色主要定位于肿瘤细胞胞浆内，显色为棕黄或棕褐色，正常肾组织极少数肾小球上皮细胞ILK有少量表达，而远端小管、近曲小管中几乎没有ILK的表达（图1）。
2.2ILK表达与肾癌临床分期的关系
早期肾癌组ILK阳性表达12例（66.7％），晚期肾癌组ILK阳性表达21例（95.5％），晚期肾癌组ILK表达明显高于早期肾癌组，经χ2检验差异有统计学意义（χ2=3.864，P<0.05）（表2）。
3 讨论
ILK是1996年Hannigan[4]发现的一丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，参与多种信号传导通路。大量研究表明，ILK的过度表达与前列腺癌[2]、卵巢癌[5] 、结肠癌[6]、胃癌[7]等多种恶性肿瘤的发生发展密切相关，认为其能够通过多种途径抑制细胞凋亡，促进细胞增殖，从而导致肿瘤发生。将过度表达ILK的前列腺癌上皮细胞导入裸鼠内能快速形成肿瘤，肿瘤细胞显示为高度侵袭性 [8]；抑制ILK的表达可导致肿瘤细胞周期停滞和肿瘤细胞凋亡，肿瘤生长被抑制，提示ILK可能可能为一癌基因。
有关ILK与肾脏疾病关系的研究主要集中于慢性肾炎、肾小球硬化、肾间质纤维化、糖尿病肾病等内科疾病[9]，ILK与肾癌的关系研究较少。肾癌是一起源于肾小管上皮细胞的恶性肿瘤，本研究结果发现，ILK在肾癌中表达水平显著高于对照组正常肾组织（P<0．01），ILK在肾癌组织中主要表达于癌细胞的胞浆中，在对照组正常肾组织多为阴性表达，极少数肾小球上皮细胞ILK有少量表达，而远端小管、近曲小管中几乎没有ILK的表达，提示ILK可能与肾癌的发病密切相关。ILK导致肿瘤形成主要机制有：①ILK能通过细胞骨架蛋白rictor蛋白促进AKT磷酸化导致肿瘤细胞形成[10]；②ILK活化或过表达也能磷酸化抑制GSK-3β，使β-连接蛋白不能被磷酸化而在胞质中累积。β-连接蛋白被认为是一种癌基因，过多的β-连接蛋白能使E-钙黏附蛋白-连接蛋白复合体功能丧失，从而导致肿瘤形成[11]。此外，ILK激活或过表达也能上调一系列癌基因和间充质细胞表型相关基因的表达，如使细胞周期蛋白cyclin D1，c-myc等表达增高，从而促进细胞增殖[12]。
肾癌是一种较易发生转移的肿瘤，临床上诊断时往往有30％的患者已发生了转移，其转移方式主要是淋巴和血行转移。本组研究通过检测早期和晚期肾癌组织ILK的表达，发现ILK的表达肾癌组织临床分期相关，ILK在晚期肾癌组的阳性表达明显高于早期肾癌，提示过表达的ILK可能促进了肾癌的浸润和转移。研究发现，ILK能通过降低肿瘤细胞间黏附力、降解ECM促进肿瘤细胞浸润和转移[13]。
本组研究在肾癌中发现了ILK的异常表达，其与肾癌的临床分期相关，参与了肾癌的发生发展。近期研究发现ILK能促进肿瘤血管形成，抑制ILK可导致肿瘤缩小，对于肾癌的治疗无疑又是一个新的切入点，ILK可能成为治疗肾癌的新靶点。
参考文献
[1] Naska S， Park KJ， Hannigan GE， et al．An essential role for the integrin-linked kinase -glycogen synthase kinase-3 beta pathway during dendrite initiation and growth [J]．J Neurosci， 2006， 26（51）: 13344-13356.
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[4] Hannigan G， Troussard AA， Dedhar S. et al. Integrin—linked kinase ; a cancer therapeutic target unique among its ILK[J]. Nat Rev Cancer， 2005， 5（1）:51-63.
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[6] Assi K， Mills J， Owen D， et al. Integrin-linked kinase regulates cell proliferation and tumour growth in murine colitis-associated carcinogenesis[J]. Gut，2008，57（7）:931-940.
[7] Kim YB， Lee SY， Ye SK. Epigenetic regulation of integrin-linked kinase expression depending on adhesion of gastric carcinoma cells[J]. Am J Physiol Cell Physiol. 2007，292（2）:C857-66.
[8] McDonald PC， Fielding AB， Dedhar S， et al. Integrin-linked kinase--essential roles in physiology and cancer biology [J]. J Cell Sci， 2008， 121（Pt 19）: 3121-3132.
[9] Li Y， Tan X， Dai C， Stolz DB， Wang D， Liu Y. Inhibition of integrin-linked kinase attenuates renal interstitial fibrosis. J Am Soc Nephrol. 2009，20（9）:1907-19018.
[10] McDonald PC， Oloumi A， Mills J， et al. Rictor and integrin-linked kinase interact and regulate Akt phosphorylation and cancer cell survival. Cancer Res， 2008， 68（6）:1618-1624.
[11] McDonald PC， Oloumi A， Mills J， et al. Rictor and integrin-linked kinase interact and regulate Akt phosphorylation and cancer cell survival. Cancer Res， 2008， 68（6）:1618-1624.
[12]Werner C， Böhm M， Friedrich EB. Role of integrin-linked kinase for functional capacity of endothelial progenitor cells in patients with stable coronary artery disease. Biochem Biophys Res Commun. 2008，377（2）:331-6.
[13]Du Y， Yang C， Zhang X， Zhang L. Expression and significance of integrin beta1 and integrin-linked kinase in laryngeal carcinoma. Lin Chung Er Bi Yan Hou Tou Jing Wai Ke Za Zhi. 2008 Jun;22（11）:500-3.