【摘 要】
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【目的】探索适于普通实验室条件的甘蔗叶绿体DNA(cpDNA)提取方法,为甘蔗叶绿体分子生物学研究提供参考。【方法】参考水稻、小麦等作物cpDNA的DNase I差速离心处理法,采用改
【机 构】
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广西大学农学院,广西甘蔗遗传改良重点实验室,广西农业科学院甘蔗研究所/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室,
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【目的】探索适于普通实验室条件的甘蔗叶绿体DNA(cpDNA)提取方法,为甘蔗叶绿体分子生物学研究提供参考。【方法】参考水稻、小麦等作物cpDNA的DNase I差速离心处理法,采用改良的DNase I差速离心法提纯甘蔗cpDNA,并对其trnL基因序列进行比对分析,证实所提取cpDNA的可行性。【结果】采用改良的DNase I差速离心处理法提取能得到量多、杂质少的cpDNA,用Eppendorf蛋白核酸测定仪检测,平均每克甘蔗样可提取2.71μg cpDNA,OD260/OD280为1.79~1.90。对提取的cpDNA的trnL基因序列进行比对分析,证实参试的甘蔗栽培种、斑割复合体后代及其回交材料的叶绿体trnL基因与已报道的甘蔗栽培种NCo 310、SP-80-3280和割手密HN0046的trnL基因相似度均在99.0%以上,并在381、386、389、392、393、400、488、490 bp等8个位点上检测出碱基突变、插入和缺失现象。【结论】采用改良的DNase I差速离心处理法提取甘蔗叶绿体DNA具有可行性,提取的甘蔗cpDNA完全可以用于后续的分子水平研究。
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