【摘 要】
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目的构建具有沉默大鼠脂肪干细胞β-catenin表达的miRNA(miR)表达载体。方法通过酶切法将合成的miR表达载体寡聚核苷酸引物与质粒pSWH相连,形成pSWH-miR;PCR扩增出增强型绿色
【机 构】
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四川大学口腔再生医学国家地方联合工程实验室,四川大学口腔疾病研究国家重点实验室,四川大学生命科学学院,四川大学材料科学与工程学院,四川大学华西口腔医院儿童口腔科,四川大学华西口腔医院口腔颌面外科,
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目的构建具有沉默大鼠脂肪干细胞β-catenin表达的miRNA(miR)表达载体。方法通过酶切法将合成的miR表达载体寡聚核苷酸引物与质粒pSWH相连,形成pSWH-miR;PCR扩增出增强型绿色荧光蛋白(EGFP)开放阅读框,插入经双酶切处理的pSWH-miR形成pSWH-EGFP-miR。β-catenin miR表达质粒瞬时转染SD大鼠脂肪干细胞(adipose-derived stem cells derived from rats,rADSCs),72h后提取细胞全蛋白,Western blot检测β-catenin的表达情况。结果针对大鼠β-catenin的不同位点,一共构建了5个miRNA表达载体(miR-780、miR-796、miR-1467、miR-1948、miR-1960),其中miR-780、miR-796对β-catenin沉默效果最好(P<0.05),miR-1960的沉默效果次之(P<0.05),miR-1467、miR-1948不具有沉默效果(P<0.05)。结论 miR-780、miR-796能够有效沉默SD大鼠脂肪干细胞中β-catenin的表达。
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