【摘 要】
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目的 设计合成新型靶向性非病毒载体K16GRGDSPC寡肽,探讨其作为载体介导外源基因转染骨髓基质干细胞(BMSCs)的可行性.方法 用固相合成法合成K16GRGDSPC并用质谱仪和高压液相
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目的 设计合成新型靶向性非病毒载体K16GRGDSPC寡肽,探讨其作为载体介导外源基因转染骨髓基质干细胞(BMSCs)的可行性.方法 用固相合成法合成K16GRGDSPC并用质谱仪和高压液相色谱仪进行检测.以其作为载体转染增强型绿色荧光蛋白质粒pcDNA3-EGFP并计数转染效率;转染转化生长因子(TGF)-β1质粒pcDNA3-TGF-β1并通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和TGF-β1敏感细胞株水貂肺上皮细胞(MVl)生长抑制法检测目的 基因TGF-β1稳定表达情况及表达产物的生物学活性.结果 质谱图显示合成肽的平均分子量为2 741.330 7 m/z,与理论上计算的平均分子量一致.高压液相色谱仪示合成肽的纯度为94%～95%,满足试验需求.以K16GRGDSPC寡肽为载体转染BMSCs的效率为(18.6±2.1)%,与脂质体(Lipofectamine)介导转染的效率(19.3±2.3)%差异无统计学意义(P＞0.05);转染TGF-β1基因阳性细胞克隆经RT-PCR扩增有特异性产物,TGF-β1敏感细胞株MⅥ的增殖受到明显抑制,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 所合成的肽是设计的K16GRGDSPC寡肽,以其为载体介导外源基因转染BMSCs是确实可行的,为下一步构建载基因仿生基质材料奠定了基础.
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