小鼠原代骨髓单核细胞分离与培养方法的改进

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目的 探索更好的原代小鼠骨髓单核细胞的分离与培养方法。方法 将小鼠股骨取出置入预冷的PBS中修剪、冲出骨髓组织至预冷的DMEM培养基中,吹打混匀制成单细胞悬液后过滤。应用差速贴壁方法培养6~8 h后留取未贴壁的细胞,加入巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)培养7 d,获得小鼠骨髓单核巨噬细胞。光镜下观察细胞形态;流式细胞术检测骨髓单核巨噬细胞表面抗原CD11b、F4/80的表达,评估细胞纯度;应用转化生长因子(TGF)-β1和M-CSF培养将其诱导分化为肌成纤维细胞,免疫印迹检测其标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果 冰上预冷缩短热缺血时间方法分离的骨髓单核细胞损伤小,细胞形态均一,纯度高(可达95%以上),较对照组有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05);加入TGF-β1共培养后可见细胞呈细长纺锤形,与对照组相比,α-SMA的表达明显升高,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论 本方法分离提取的原代小鼠骨髓单核细胞纯度高,状态良好,表型稳定,满足做进一步实验研究的要求。
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