研究骨癌痛发展和维持过程中小鼠脊髓水平miR-212表达的变化规律及连续鞘内注射miR-212反义锁核酸LNA-anti-miR-212对骨癌痛小鼠痛行为的影响。
方法本实验分为两个部分：(一)骨癌痛小鼠脊髓水平miR-212表达的变化规律：C3H/HeJ雄性小鼠36只，随机分为假手术组(sham组，n＝18)和肿瘤组(T组，n＝18)。sham组小鼠在右侧股骨远端骨髓腔注射不含肿瘤细胞的α-MEM，T组小鼠在右侧股骨远端骨髓腔注射纤维肉瘤细胞NCTC 2472，建立骨癌痛模型。在术前1 d，术后4 d、7 d、10 d、14 d、21 d，sham组和T组各随机取三只小鼠处死，取脊髓腰膨大标本，用Real-time PCR的方法检测脊髓水平miR-212的表达情况。(二)连续鞘内注射LNA-anti-miR-212对骨癌痛小鼠痛行为的影响：C3H/HeJ雄性小鼠24只，随机分为四组：L组(鞘内注射LNA-anti-miR-212，n＝6)、L’组(鞘内注射LNA'-negative control，n＝6)、C组(鞘内注射溶媒无核酸酶水，n＝6)和S组(假手术处理，n＝6)。L组、L’组和C组小鼠在右侧股骨远端注射纤维肉瘤细胞NCTC 2472，S组小鼠在右侧股骨远端骨髓腔注射不含肿瘤细胞的α-MEM。所有小鼠于术前1 d、术后4 d、7 d、10 d、14 d测小鼠痛行为指标，包括自发抬足次数和机械缩足阈值(PWMT)，术后14 d，L组、L’组、C组小鼠分别鞘内注射LNA-anti-miR-212 12 pmol/5 μl、LNA'-negative control 12 pmol/5 μl和无核酸酶水5 μl，连续鞘内注射7 d，1次/d，每天测小鼠痛行为指标，至术后第21天。
结果miR-212的表达变化表现为：与基础值相比，sham组和T组小鼠在术后第4天，脊髓水平miR-212明显升高(P<0.05)；与基础值和sham组相比，T组小鼠脊髓水平miR-212在术后7 d、10 d、14 d、21 d均明显升高(P<0.05)。连续鞘内注射LNA-anti-miR-212改善骨癌痛小鼠痛行为：术后19 d至21 d, 与L’组和C组相比，L组小鼠PWMT[19 d(1.07±0.16)g, 20 d(1.13±0.21)g, 21 d(1.27±0.21)g)]明显升高(P<0.05)，自发抬足次数明显降低[19 d(6.67±1.04)，20 d(6.62±1.39)，21 d(6.47±1.17) ](P<0.05)。与14 d给药前相比，L组小鼠术后19 d至21 d的PWMT明显升高(P<0.05)，自发抬足次数明显降低(P<0.05)。
结论骨癌痛发展过程中，脊髓水平miR-212表达量升高。连续鞘内注射LNA-anti-miR-212可以缓解骨癌小鼠痛行为。