【摘 要】
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液质联用分析重组人组织型纤溶酶原激活物变构体(TNK-tPA)的一级结构。用糖苷酶切除其糖基,测定质谱分子量;对其进行还原、烷基化、胰蛋白酶酶解,测定液质肽图及串联质谱图,
【机 构】
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中国食品药品检定研究院,卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,
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液质联用分析重组人组织型纤溶酶原激活物变构体(TNK-tPA)的一级结构。用糖苷酶切除其糖基,测定质谱分子量;对其进行还原、烷基化、胰蛋白酶酶解,测定液质肽图及串联质谱图,通过质谱图的解析对氨基酸序列进行验证,并对翻译后修饰进行鉴定。该蛋白氨基酸序列与理论一致,其中约5%的M207发生氧化;约80%的T61发生岩藻糖化修饰;N103、N448、N184(约15%)存在N-糖基化修饰,糖型均为复杂型N-糖。液质联用结合适当的样品前处理方式,可快速、准确地对该蛋白的一级结构进行鉴定。
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