【摘 要】
：
【目的】研究旨在分析小鼠Nr1d1基因序列信息及其所编码蛋白的结构和功能,构建并筛选出干扰效率最优的小鼠Nr1d1基因慢病毒干扰载体。【方法】对小鼠Nr1d1核苷酸序列和氨基酸序列进行生物信息学分析;设计合成4对小鼠Nr1d1基因的特异性shRNA序列和1对无义序列;分别将它们连接至pCD513B-U6慢病毒干扰载体上构建重组质粒,通过PCR及测序鉴定,分别将鉴定正确的重组质粒命名为pCD513B
【基金项目】
：
国家自然科学基金面上项目（31771301）； 中国博士后科学基金第11批特别资助（2018T111112）~~；
论文部分内容阅读
【目的】研究旨在分析小鼠Nr1d1基因序列信息及其所编码蛋白的结构和功能,构建并筛选出干扰效率最优的小鼠Nr1d1基因慢病毒干扰载体。【方法】对小鼠Nr1d1核苷酸序列和氨基酸序列进行生物信息学分析;设计合成4对小鼠Nr1d1基因的特异性shRNA序列和1对无义序列;分别将它们连接至pCD513B-U6慢病毒干扰载体上构建重组质粒,通过PCR及测序鉴定,分别将鉴定正确的重组质粒命名为pCD513B-U6-shRNA-Nr1d1-1（sh1）、pCD513B-U6-shRNA-Nr1d1-2（sh2）、pCD513B-U6-shRNA-Nr1d1-3（sh3）、pCD513B-U6-shRNANr1d1-4（sh4）和pCD513B-U6-shRNA-Nr1d1-NC（shn）;将重组质粒和辅助包装质粒共转染至HEK293T细胞中,收毒后将病毒颗粒感染小鼠胚胎成纤维细胞（NIH3T3细胞）;使用荧光显微镜观察HEK293T细胞和NIH3T3细胞中的绿色荧光蛋白表达情况;Western Blotting检测并筛选出干扰效率最佳的载体。【结果】小鼠Nr1d1基因编码区序列全长1 848 bp,编码615个氨基酸,其中丝氨酸含量最高（14.0%）,色氨酸含量最低（0.5%）;小鼠Nr1d1基因核苷酸序列与大鼠、人及黑猩猩的相似性分别为94.8%、90.0%和90.0%;NR1D1蛋白可能与ARNTL、NCOR1和NPAS2等蛋白发生相互作用。成功构建4个小鼠Nr1d1基因的慢病毒干扰载体,将它们转染至HEK293T细胞后观察到绿色荧光蛋白表达;将病毒颗粒感染NIH3T3细胞后观察到绿色荧光蛋白表达;与对照组shn相比,慢病毒干扰载体sh2、sh3、sh4均能有效下调NR1D1蛋白的表达,且sh3的干扰效率最高。【结论】研究成功构建了小鼠Nr1d1基因的慢病毒干扰载体,筛选验证了其在NIH3T3细胞中的干扰效率,并对小鼠Nr1d1基因及其编码蛋白进行了生物信息学分析,为进一步研究小鼠Nr1d1基因的生物学功能提供了前期理论基础和关键材料支撑。
其他文献
杭州市亚运村1,2号楼为超高层部分框支剪力墙结构住宅,首先介绍了其结构选型、地基与基础设计,并讨论了结构超限情况,确定了抗震性能目标;随后,进行了多遇地震作用下的结构弹性分析和罕遇地震作用下的动力弹塑性分析。最后针对楼板开洞及框支梁进行专项分析,构件均满足规范要求。
文中设计了一种去耦天线罩,为解决紧凑排列的大规模天线阵列中相邻端口隔离度较低的问题提供了参考。天线罩主体是一层具有低介电常数和低损耗性的介质板,其上印刷了周期性排列的金属贴片结构。通过调整金属贴片的形状以及天线罩到天线阵列的距离,使天线罩产生的反射波与阵中的耦合波幅度相同、相位相反,二者相互抵消,达到增加阵中端口间隔离度的效果。测试结果表明,加载去耦天线罩前,天线阵列单元内异极化隔离度为-20 d
茶文化背景下为探究大学就业指导中思政教育的发展路径,本文拟从引言入手,结合茶文化背景下高校思政教育在大学生就业指导中的作用,对茶文化背景下大学就业指导中思政教育发展现状进行了全面而深入的分析,并在此基础上探究了茶文化背景下大学就业指导中思政教育发展路径。
本文研究了提出了一种用于多输入多输出（MIMO）天线隔离度的缝隙弯折线谐振器,该谐振器尺寸较小,可提高2.4-2.5GHz带内隔离度,以用于无线局域网（WLAN）应用。仿真结果表明,通过采用缝隙弯折线谐振器结构,工作频带中两个天线元件之间的隔离度提升11dB,而实际在板测试中隔离度提升13dB,这表明它在MIMO系统中具有出色的性能。
互联网和各类社交媒体的迅速发展和广泛普及,使网络环境下开源情报在侦查中的深度应用成为可能,对推进侦查进程具有重要意义。厘清开源情报应用的基本条件和重要价值,划定开源情报在侦查中的应用边界是实现深度应用的基础和前提。网络环境下开源情报在侦查中的应用是实现全源情报分析,提升侦查效率的重要途径,应在转变价值观念、构建应用体系、提升应用能力等方面促进开源情报在侦查中的实践应用。
随着科技的蓬勃发展,数据的储存量和利用率不断提高,而我国社会也已步入大数据时代,科学运用大数据来服务我国公安出入境管理工作、提升出入境管理效能变得尤为重要。现阶段我国出入境管理部门存在着大数据意识薄弱、数据获取与共享能力欠缺、数据分析与应用能力不足、大数据领域缺乏专业人才等一系列问题,在一定程度上影响着出入境管理部门的工作效率和服务水平。为摆脱当前困境,转变工作理念、完善系统建设、培养储备人才等多
目的探究分析p21活化激酶6（p21-activated kinases 6,PAK6）基因对裸鼠乳腺癌早期放疗疗效的影响及作用机制。方法采用实时荧光逆转录定量聚合酶链反应（real-time reverse transcription quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR）实验和Western blot实验检测人正常乳腺上皮细胞MCF-1
发表在《美国临床营养杂志》（American Journal of Clinical Nutrition,AJCN）上新近研究表明,每天仅喝4杯咖啡实际上就可以帮助减少体内的脂肪。这项发现是在一项为期24周的调查之后进行的,该调查跟踪了咖啡对新加坡126名超重男女的影响。研究人员最初着手研究咖啡是否可以通过降低发生胰岛素抵抗的风险来帮助降低2型糖尿病的风险,胰岛素抵抗可能导致血糖急剧上升,最
地质建造背景可以直接反映该地区的形成演化过程、物质组成和地理条件,直接或间接地影响基岩上的生态环境。小范围内生态环境效应由地质建造直接控制,再由不同的气候条件、人类活动进行改造。土壤中的营养元素基本继承于母岩,而气候条件和人类活动同样会对土壤的物理性质、化学性质形成扰动。以中国地质调查局生态地质调查工程之大凉山区生态地质调查项目为依托,以沉积建造特征、空间分布、大地构造属性等因素为基础,将西昌地区
物联云是在当今大数据时代,利用物联技术和云计算相结合产生的一种专门服务于制造业的新型IT服务生态链系统。物联云的应用和发展将大大促进工业化和信息化的深度融合,提升工业企业市场竞争能力和创新能力,加速整个产业的转型升级发展。焦化公司物联云平台的设计旨在全面提升企业的生产管控水平,安全环境管理水平及设备管理水平,提高行业竞争能力。