【摘 要】
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目的:观察载脂蛋白A-I(apoA-I)模拟肽D-4F对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的影响,并探讨其机制.方法:巨噬细胞种植于24孔板,用1.85×107 Bq/孔 3H -胆固醇和含50 μg/mL氧化型
【机 构】
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中南大学湘雅二医院心内科,长沙,410011湖南省人民医院心内科,长沙,410005;中南大学湘雅二医院心内科,长沙,410011;
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目的:观察载脂蛋白A-I(apoA-I)模拟肽D-4F对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的影响,并探讨其机制.方法:巨噬细胞种植于24孔板,用1.85×107 Bq/孔 3H -胆固醇和含50 μg/mL氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)共同孵育 24 h后,给予不同浓度的D-4F(0～100 μg/mL)干预24 h,收集细胞用液体闪烁计数法检测胆固醇流出.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞内环磷酸腺苷(cAMP)含量,采用实时荧光定量PCR及Western印迹检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA及蛋白表达.结果:D-4F呈浓度依赖及时间依赖性促进巨噬细胞内胆固醇流出,增加细胞内cAMP 水平,上调ABCA1 mRNA和蛋白表达.8-Br-cAMP显著增加D-4F介导的胆固醇流出和ABCA1表达,而蛋白激酶A(PKA)抑制剂虽然对基础胆固醇流出及ABCA1表达几乎无作用,却可以抑制8-Br-cAMP对胆固醇流出和ABCA1表达的促进作用.结论:D-4F 促进巨噬细胞胆固醇流出,cAMP释放及ABCA1表达,可能与激活cAMP-PKA-ABCA1通路有关.
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